[發(fā)明專利]一種淡水魚類細(xì)菌病藥敏檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911069858.2
• 申請(qǐng)日: 2019-11-05
• 公開（公告）號(hào): CN110592178A
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳福艷;歐陽(yáng)賢華;黎建斌;梁萬(wàn)文;陳福彩;李大列;黃彩林;雷愛(ài)瑩;羅洪林;李旻
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/18
• 分類號(hào): C12Q1/18
• 代理公司: 11569 北京高沃律師事務(wù)所
• 代理人: 董大媛

本發(fā)明提供了一種淡水魚類細(xì)菌病藥敏檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用，屬于水產(chǎn)疾病防治技術(shù)領(lǐng)域。一種淡水魚類細(xì)菌病快速檢測(cè)藥敏試劑盒，包括TSA培養(yǎng)基、增菌液和漁類抗菌藥紙片。基于所述試劑盒檢測(cè)淡水魚類細(xì)菌病藥敏的方法包括：病樣組織液的提取、細(xì)菌擴(kuò)增、細(xì)菌接種培養(yǎng)和結(jié)果判斷。本發(fā)明提供的試劑盒能快速篩選出對(duì)病原菌敏感的漁用藥物，及時(shí)指導(dǎo)養(yǎng)殖戶高效用藥，提高用藥治療效果；檢測(cè)方法簡(jiǎn)單方便；對(duì)實(shí)驗(yàn)技能要求不高，臨床應(yīng)用性強(qiáng)，同時(shí)還可實(shí)現(xiàn)耐藥菌株的分離。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)疾病防治技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種淡水魚類細(xì)菌病藥敏檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

我國(guó)是世界水產(chǎn)養(yǎng)殖大國(guó)，也是水產(chǎn)品貿(mào)易大國(guó)，水產(chǎn)品產(chǎn)量占世界的70％，出口額連續(xù)6年居世界首位。但近年來(lái)，由于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，細(xì)菌性疾病時(shí)有發(fā)生，處理不當(dāng)，可造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，細(xì)菌病治療最有效的是抗生素，但是近年來(lái)藥物治療效果不顯著并出現(xiàn)反復(fù)發(fā)作的現(xiàn)象，原因可能與引起細(xì)菌病不同種類細(xì)菌有關(guān)，另外可能由于抗生素的頻繁和不規(guī)范使用，引起抗生素耐藥性、抗藥性和藥物殘留等問(wèn)題，特別是藥物殘留問(wèn)題會(huì)直接影響我國(guó)水產(chǎn)品出口貿(mào)易。因此，很有必要在使用藥物治療前，進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，快速篩選出高效的治療藥物。然而，目前市場(chǎng)上只有針對(duì)人源細(xì)菌或哺乳動(dòng)物源細(xì)菌相關(guān)的藥敏試劑盒，而沒(méi)有專門針對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物源細(xì)菌使用的產(chǎn)品；也有一些學(xué)者針對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物源細(xì)菌藥敏試劑盒開展研究，但仍存在使用繁雜，環(huán)境條件要求高，用時(shí)長(zhǎng)，抗生素品種與漁藥產(chǎn)品脫節(jié)等問(wèn)題，且只停留在研究階段，尚未達(dá)到推廣和應(yīng)用；另外漁藥市場(chǎng)上的抗生素產(chǎn)品種類繁多、含量與成分不明，還可能存在魚目混珠的情況。因此急需一種科學(xué)、快速和貼合實(shí)際的用藥指導(dǎo)，指導(dǎo)養(yǎng)殖戶及時(shí)、準(zhǔn)確和高效地使用抗生素類藥物治療，減少抗生素的使用，減少養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)損失。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種淡水魚類細(xì)菌病藥敏檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用，所述試劑盒能快速、準(zhǔn)確、實(shí)用方便的檢測(cè)魚病樣的的漁藥敏感性，及時(shí)指導(dǎo)養(yǎng)殖戶科學(xué)用藥。

本發(fā)明提供了一種淡水魚類細(xì)菌病藥敏檢測(cè)試劑盒，包括以下組成：

TSA培養(yǎng)基、漁類抗菌藥的藥敏紙片和增菌液。

優(yōu)選的，所述漁類抗菌藥的藥敏紙片包括氟苯尼考的藥敏紙片、磺胺異惡唑的藥敏紙片、阿莫西林的藥敏紙片、恩諾沙星的藥敏紙片、鹽酸新霉素的藥敏紙片、鏈霉素的藥敏紙片、諾氟沙星的藥敏紙片和強(qiáng)力霉素的藥敏紙片中的一種或幾種。

優(yōu)選的，所述增菌液以TSB培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，還包括體積濃度9％～11％的魚血清和0.02％～0.04％的阿爾瑪藍(lán)溶液指示劑。

優(yōu)選的，還包括滴管、封口膠和用于盛裝TSA培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿。

優(yōu)選的，所述培養(yǎng)皿的直徑為90mm。

本發(fā)明提供了所述檢測(cè)試劑盒在篩選治療淡水魚類細(xì)菌病的抗生素或篩選耐抗生素的菌株中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種基于所述檢測(cè)試劑盒快速檢測(cè)淡水魚類細(xì)菌病藥敏的方法，包括以下步驟：

1)取患細(xì)菌病淡水魚的肝臟，剪碎，得到的肝臟糜與增菌液混合，靜置，待混合液變淡紅色后，取2～3滴混合液滴入TSA培養(yǎng)基上，涂布，得到涂布有混合液的TSA培養(yǎng)基；

2)取漁類抗菌藥的藥敏紙片置于所述涂布有混合液的TSA培養(yǎng)基上，壓平所述藥敏紙片后密封；

3)將密封后的TSA培養(yǎng)基置于37℃條件下恒溫培養(yǎng)12～24h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，測(cè)定藥敏紙片周圍的無(wú)菌圈直徑，根據(jù)美國(guó)CLSI判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥敏程度判讀。

優(yōu)選的，步驟1)中所述靜置的時(shí)間為4～6h。

優(yōu)選的，步驟1)中涂布后，還包括將涂布有混合液的TSA培養(yǎng)基靜置5～6min晾干水分。