[發(fā)明專利]一種婦科腫瘤原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911069251.4
• 申請(qǐng)日: 2019-11-05
• 公開（公告）號(hào): CN111621478A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹申意;張函槊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京基石生命科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 張立娜

本發(fā)明公開了一種婦科腫瘤原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法。本發(fā)明提供了婦科腫瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)方法及配套試劑，該技術(shù)核心是：用溫和細(xì)胞解離試劑處理婦科腫瘤實(shí)體瘤組織，最大程度保證了組織中腫瘤細(xì)胞活力；配制特殊無(wú)血清培養(yǎng)基，利用懸浮培養(yǎng)體系對(duì)婦科腫瘤來源的實(shí)體瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，保證腫瘤細(xì)胞正常擴(kuò)增的同時(shí)最大限度的排除正常細(xì)胞的干擾。利用本發(fā)明方法得到的婦科腫瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)物可用于多種細(xì)胞水平體外實(shí)驗(yàn)、二代測(cè)序、構(gòu)建動(dòng)物模型、構(gòu)建細(xì)胞系等等。可預(yù)見，這種培養(yǎng)方法在婦科腫瘤的研究和臨床診斷治療領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種婦科腫瘤原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

常見的婦科腫瘤有乳腺癌、卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌等。據(jù)國(guó)家癌癥中心2018年數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，2014年，我國(guó)乳腺癌占女性惡性腫瘤發(fā)病率的16.5％，死亡率達(dá)7.8％，分別排女性腫瘤的第一位和第五位。當(dāng)前，我國(guó)乳腺癌5年生存率僅73.1％vs 90％(美國(guó))，與發(fā)達(dá)國(guó)家還有較大差距。此外，我國(guó)卵巢癌發(fā)病率占據(jù)女性惡性腫瘤的2.5％，過去十年增低加了30％。這些婦科腫瘤對(duì)我國(guó)女性的生命健康提出了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。

盡管世界各國(guó)的科研和醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)婦科腫瘤的病因以及發(fā)生發(fā)展過程的研究都有很大力度的投入，但是人類對(duì)這種疾病仍然知之甚少。婦科腫瘤是一類復(fù)雜疾病，其發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，涉及到諸多信號(hào)分子相互作用，形成了一個(gè)復(fù)雜的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)還受到外界環(huán)境因素的影響。婦科腫瘤的病因和發(fā)生發(fā)展過程有很強(qiáng)的個(gè)體差異性，不能一概而論。因此將婦科腫瘤實(shí)體瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)物作為模型進(jìn)行個(gè)體化精準(zhǔn)研究是婦科腫瘤研究領(lǐng)域乃至婦科腫瘤診斷治療領(lǐng)域的趨勢(shì)。

現(xiàn)有的原代腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)主要有2D培養(yǎng)，3D培養(yǎng)，重編程培養(yǎng)等幾類，這些方法都不同程度的面臨培養(yǎng)周期極長(zhǎng)，培養(yǎng)成功率低，雜細(xì)胞難以去除等問題。

發(fā)明內(nèi)容

為了有效解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種新的婦科腫瘤實(shí)體瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及配套試劑，該技術(shù)的核心是：(1)用溫和細(xì)胞解離試劑處理婦科腫瘤實(shí)體瘤組織，最大程度的保證了組織中腫瘤細(xì)胞的活力；(2)配制特殊的無(wú)血清培養(yǎng)基，利用懸浮培養(yǎng)體系對(duì)婦科腫瘤原代細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，保證腫瘤細(xì)胞正常擴(kuò)增的同時(shí)最大限度的排除正常細(xì)胞的干擾。

第一方面，本發(fā)明要求保護(hù)一種培養(yǎng)婦科腫瘤原代細(xì)胞的方法。

本發(fā)明所要求保護(hù)的培養(yǎng)婦科腫瘤原代細(xì)胞的方法，可包括如下步驟：

利用婦科腫瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)婦科腫瘤原代細(xì)胞；

所述婦科腫瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)基由抗菌抗真菌劑三抗(青霉素-鏈霉素-兩性霉素B)、HEPES、GlutaMax、人重組蛋白EGF、人重組蛋白bFGF、人重組蛋白HGF、人重組蛋白MSP、皮質(zhì)醇(hydrocortisone)、N-2Supplement、Y-27632、孕酮(Progesterone)、β-雌二醇(β-Estradiol)和Advanced DMEM/F12培養(yǎng)基組成。其中，所述抗菌抗真菌劑三抗中的青霉素的終濃度為100-200U/mL(如100U/mL)；所述抗菌抗真菌劑三抗中的鏈霉素的終濃度為100-200μg/mL(如100μg/mL)；所述抗菌抗真菌劑三抗中的兩性霉素B的終濃度為250-250ng/mL(如250ng/mL)；所述HEPES的終濃度為8-12mM(如10mM)；所述GlutaMax的終濃度為0.8-1.2％(如1％，％表示體積百分含量)；所述人重組蛋白EGF的終濃度為10-100ng/mL；所述人重組蛋白bFGF的終濃度為10-50ng/mL；所述人重組蛋白HGF的終濃度為5-25ng/mL；所述人重組蛋白MSP的終濃度為5-25ng/mL；所述皮質(zhì)醇(hydrocortisone)的終濃度為1-10μg/mL；所述N-2Supplement的終濃度為1％(體積百分含量)；所述Y-27632的終濃度為5-20μM；所述孕酮的終濃度為50-100nM；所述β-雌二醇的終濃度為10-50nM；余量均為Advanced DMEM/F12培養(yǎng)基。