[發明專利]一種婦科腫瘤原代細胞的培養方法

在審

• 申請號: 201911069251.4
• 申請日: 2019-11-05
• 公開（公告）號: CN111621478A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 尹申意;張函槊
• 申請（專利權）人: 北京基石生命科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 張立娜

本發明公開了一種婦科腫瘤原代細胞的培養方法。本發明提供了婦科腫瘤原代細胞培養方法及配套試劑，該技術核心是：用溫和細胞解離試劑處理婦科腫瘤實體瘤組織，最大程度保證了組織中腫瘤細胞活力；配制特殊無血清培養基，利用懸浮培養體系對婦科腫瘤來源的實體瘤細胞進行體外培養，保證腫瘤細胞正常擴增的同時最大限度的排除正常細胞的干擾。利用本發明方法得到的婦科腫瘤原代細胞培養物可用于多種細胞水平體外實驗、二代測序、構建動物模型、構建細胞系等等。可預見，這種培養方法在婦科腫瘤的研究和臨床診斷治療領域具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種婦科腫瘤原代細胞的培養方法。

背景技術

常見的婦科腫瘤有乳腺癌、卵巢癌和子宮內膜癌等。據國家癌癥中心2018年數據統計，2014年，我國乳腺癌占女性惡性腫瘤發病率的16.5％，死亡率達7.8％，分別排女性腫瘤的第一位和第五位。當前，我國乳腺癌5年生存率僅73.1％vs 90％(美國)，與發達國家還有較大差距。此外，我國卵巢癌發病率占據女性惡性腫瘤的2.5％，過去十年增低加了30％。這些婦科腫瘤對我國女性的生命健康提出了嚴峻的挑戰。

盡管世界各國的科研和醫療機構對婦科腫瘤的病因以及發生發展過程的研究都有很大力度的投入，但是人類對這種疾病仍然知之甚少。婦科腫瘤是一類復雜疾病，其發生、發展是一個動態的過程，涉及到諸多信號分子相互作用，形成了一個復雜的分子調控網絡，同時還受到外界環境因素的影響。婦科腫瘤的病因和發生發展過程有很強的個體差異性，不能一概而論。因此將婦科腫瘤實體瘤原代細胞培養物作為模型進行個體化精準研究是婦科腫瘤研究領域乃至婦科腫瘤診斷治療領域的趨勢。

現有的原代腫瘤細胞培養技術主要有2D培養，3D培養，重編程培養等幾類，這些方法都不同程度的面臨培養周期極長，培養成功率低，雜細胞難以去除等問題。

發明內容

為了有效解決上述技術問題，本發明提供了一種新的婦科腫瘤實體瘤原代細胞培養技術及配套試劑，該技術的核心是：(1)用溫和細胞解離試劑處理婦科腫瘤實體瘤組織，最大程度的保證了組織中腫瘤細胞的活力；(2)配制特殊的無血清培養基，利用懸浮培養體系對婦科腫瘤原代細胞進行體外培養，保證腫瘤細胞正常擴增的同時最大限度的排除正常細胞的干擾。

第一方面，本發明要求保護一種培養婦科腫瘤原代細胞的方法。

本發明所要求保護的培養婦科腫瘤原代細胞的方法，可包括如下步驟：

利用婦科腫瘤原代細胞培養基懸浮培養婦科腫瘤原代細胞；

所述婦科腫瘤原代細胞培養基由抗菌抗真菌劑三抗(青霉素-鏈霉素-兩性霉素B)、HEPES、GlutaMax、人重組蛋白EGF、人重組蛋白bFGF、人重組蛋白HGF、人重組蛋白MSP、皮質醇(hydrocortisone)、N-2Supplement、Y-27632、孕酮(Progesterone)、β-雌二醇(β-Estradiol)和Advanced DMEM/F12培養基組成。其中，所述抗菌抗真菌劑三抗中的青霉素的終濃度為100-200U/mL(如100U/mL)；所述抗菌抗真菌劑三抗中的鏈霉素的終濃度為100-200μg/mL(如100μg/mL)；所述抗菌抗真菌劑三抗中的兩性霉素B的終濃度為250-250ng/mL(如250ng/mL)；所述HEPES的終濃度為8-12mM(如10mM)；所述GlutaMax的終濃度為0.8-1.2％(如1％，％表示體積百分含量)；所述人重組蛋白EGF的終濃度為10-100ng/mL；所述人重組蛋白bFGF的終濃度為10-50ng/mL；所述人重組蛋白HGF的終濃度為5-25ng/mL；所述人重組蛋白MSP的終濃度為5-25ng/mL；所述皮質醇(hydrocortisone)的終濃度為1-10μg/mL；所述N-2Supplement的終濃度為1％(體積百分含量)；所述Y-27632的終濃度為5-20μM；所述孕酮的終濃度為50-100nM；所述β-雌二醇的終濃度為10-50nM；余量均為Advanced DMEM/F12培養基。