[發明專利]F基因型腮腺炎病毒減毒株及構建方法和應用

有效

• 申請號: 201911066044.3
• 申請日: 2019-11-04
• 公開（公告）號: CN111019910B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 田大勇;張亞靜;朱鳳才;傅振芳;解麗霞;劉元寶;阮俊程;王金亮;安祺
• 申請（專利權）人: 上海青賽生物科技有限公司;北京賽爾富森生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/04
• 分類號: C12N7/04;A61K39/165;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;崔佳佳

本發明提供了一種F基因型腮腺炎病毒減毒株及構建方法和應用。具體地，本發明提供了一種F基因型腮腺炎病毒減毒株，所述減毒株是保藏號為CCTCC NO:V201950的腮腺炎病毒QS?F?SH2。本發明還提供了包含所述F基因型腮腺炎病毒減毒株作為活性成分的疫苗組合物及其制備方法。本發明的腮腺炎病毒減毒疫苗株能夠更加匹配中國地區優勢流行的F型腮腺炎病毒，且與當前的疫苗株在生長特性、免疫原性和神經毒力等方面的水平相當。此外，本發明篩選出的腮腺炎病毒基因工程弱毒株能夠在雞胚細胞中穩定生產，安全性高。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種F基因型腮腺炎病毒減毒株及其制備方法和應用。

背景技術

流腮是由腮腺炎病毒引起的一種急性傳染病，在20世紀中葉以前，是嚴重危害兒童和青少年健康的傳染病之一。腮腺炎的臨床癥狀以腮腺腫痛為主，常繼發腦炎和生殖系統炎癥等，重癥患者可能死亡；且當前該病已成為我國不育癥的六大誘因之一。

20世紀60年代以來，隨著腮腺炎減毒活疫苗的開發成功和大范圍使用，包括我國在內的全球大多數國家的腮腺炎的發病率急劇下降且長時間維持在較低水平(十萬分之一以下)。但是，20世紀90年代以來，許多國家(尤其是歐洲和東亞國家)的腮腺炎發病率開始逐步上升，且即使大范圍強化免疫腮腺炎疫苗，腮腺炎的發病率也沒有得到有效的控制。以我國為例，盡管2008年國家將麻疹-腮腺炎-風疹三聯疫苗列入擴大免疫規劃，每年仍然會出現流腮疫情局部暴發的情況，且發病率逐年提升。

針對于當前腮腺炎嚴峻的防控形勢，世界各國的病毒學家和WHO在探究其原因方面做了諸多工作，也得到了公認的研究成果：不同基因型腮腺炎病毒之間不能完全實現交叉保護。腮腺炎病毒雖然只有一個血清型，卻有11個不同的基因型。20世紀全球范圍內流行的腮腺炎基因型以A基因型為主。但是近20年，多數國家的優勢流行毒株都是非A基因型病毒：例如，歐美主要以G基因型病毒為主，伴有H、D基因型；在我國F基因型毒株占絕大多數，G基因型病毒只占很小的比例。

綜上，研發新基因型的更有效的腮腺炎疫苗意義重大且刻不容緩。

目前，全球的腮腺炎疫苗均是A基因型，采用的都是傳統致弱手段，生產用細胞基質均為原代雞胚成纖維細胞。

傳統腮腺炎減毒活疫苗致弱手段都是連續在非最適條件下傳代而實現的。具體過程是，首先在原代或者傳代細胞中擴增，再在原代雞胚成纖維細胞中持續傳代致弱。其缺點有二：第一，成功率低，病毒可能致弱失敗，也可能造成免疫原性隨著毒力減弱而降低；第二，弱化的終點不好判斷。所以，為了疫苗不至于毒力返強，國家對傳統腮腺炎減毒活疫苗的病毒代次限定在一個很窄的范圍內。并且，對于傳統腮腺炎減毒活疫苗致弱手段，不能解釋其致弱的原理，故需要長時間且大量的評價試驗來確定新疫苗株的安全性和遺傳穩定性，疫苗的研發周期很長。

相比于傳統腮腺炎病毒活疫苗致弱技術，新型的腮腺炎病毒致弱策略主要是通過反向遺傳操作技術，基于系統和明晰的病毒蛋白功能研究，直接將病毒的毒力相關基因刪除，從而獲得致弱機理清晰的減毒腮腺炎疫苗株。在病毒學研究中，通過突變或者缺失毒力相關基因獲得毒力減弱且免疫原性保持穩定的候選疫苗株，是一種有效的新型減毒活疫苗制備策略。

迄今為止，對于F基因型(我國的優勢流行毒株)腮腺炎減毒活疫苗的研究較少，并且也只驗證了其在Vero細胞上的生長特性，不具備按我國藥典要求開展生產的能力。需要特別注意的是，全球的腮腺炎減毒活疫苗都是在原代雞胚成纖維細胞中生產而得的，如果換用其它的細胞基質，需要完成很多工藝和質量控制方面的研究，研發周期會很漫長。

因此，本領域迫切需要開發一種有效的、安全性高的可在原代雞胚成纖維細胞中大規模制備生產而得的F基因型腮腺炎減毒活疫苗的高效制備技術。

發明內容

本發明的目的就是提供一種有效的、安全性高的可在原代雞胚成纖維細胞中大規模制備生產而得的F基因型腮腺炎減毒活疫苗的高效制備技術。