[發明專利]一種提高有機磷農藥降解漆酶活力的方法

在審

• 申請號: 201911064908.8
• 申請日: 2019-11-04
• 公開（公告）號: CN110669742A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發明（設計）人: 孫芳
• 申請（專利權）人: 孫芳
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N1/14;A62D3/02;C12R1/645;A62D101/04;A62D101/26;A62D101/28
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1.一種提高有機磷農藥降解漆酶活力的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）菌種的活化：在無菌條件下，將保藏的朱紅栓菌（Trametes cinnabarina (Jacq.)Fr.）菌株接種于PDA培養基平板上，28℃恒溫培養至菌絲體長滿平板表面；

2）種子液的培養：從活化的平板上用5mm打孔器打出5塊菌餅，接種于種子培養基，搖瓶裝液量為100mL/250mL，26℃、150r/min恒溫振蕩培養2d，制成一級種子液；將一級種子液以6%的接種量再接種于新鮮種子培養基中，搖瓶裝液量為300mL/1000mL，26℃、150r/min恒溫振蕩培養2d，制成二級種子液；

3）發酵產酶培養：將二級種子液先在無菌條件下用勻漿儀均質30s，然后采用火焰接種法將其接入已滅菌的發酵培養基中，發酵罐裝液量為60%（v/v）；發酵培養3d后開始補料，以20g/L麥芽糊精為補料量，每隔24h補料1次，連續補加3次；發酵培養時間一共為 7~8d；

4）粗酶液的制備：發酵結束后，將發酵液于6000r/min條件下離心10min，取上清液即為粗酶液。

2.根據權利要求1所述的一種提高有機磷農藥降解漆酶活力的方法，其特征在于，所述步驟2）中，種子培養基的配方為：葡萄糖 18~22g/L，蛋白胨2.5~3.5g/L，酵母膏0.8~1.2g/L，K₂HPO₄ 1.0~2.0g/L，KH₂PO₄ 1.0~2.0g/L，MgSO₄·7H₂O 1.3~1.7g/L，胺鮮酯0.7~0.9mg/L，VB₁0.3~0.5mg/L，pH值為5.6~6.0。

3.根據權利要求1所述的一種提高有機磷農藥降解漆酶活力的方法，其特征在于，所述步驟3）中，二級種子液的接種量為8%~10%（v/v）。

4.根據權利要求1所述的一種提高有機磷農藥降解漆酶活力的方法，其特征在于，所述步驟3）中，發酵培養基的配方為：麥芽糊精26~34g/L，玉米蛋白1.5~2.5g/L，蛋白胨1.5~2.5g/L，KH₂PO₄2.7~3.3g/L，MgSO₄·7H₂O 1.3~1.7g/L，CaCl₂0.2~0.3g/L，NaCl0.1~0.2g/L，微量元素混合液8~12ml/L，苯甲基丙氨酸80~100mg/L，酪氨酸60~80mg/L，腺嘌呤24~32mg/L，水楊酸140~160μmol/L，胺鮮酯1.1~1.3mg/L，兒茶素0.4~0.6mmol/L，藜蘆醇15~20μmol/L，富勒烯水溶液45~55ml/L，亞精胺3.5~3.9mg/L，吐溫-80 0.7~1.3g/L。

5.根據權利要求1所述的一種提高有機磷農藥降解漆酶活力的方法，其特征在于，所述步驟3）中，發酵過程采用加1mol/L的氨水和1mol/L鹽酸對發酵液進行酸堿度調節，控制pH值維持在5.0~5.5。

6.根據權利要求1所述的一種提高有機磷農藥降解漆酶活力的方法，其特征在于，所述步驟3）中，發酵溫度為25~27℃，通氣量為0.5~1vvm，攪拌轉速為200~240r/min。