[發明專利]梓醇提取物治療2型糖尿病的方法與系統

在審

• 申請號: 201911064692.5
• 申請日: 2019-10-23
• 公開（公告）號: CN112691198A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 肖敏
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K31/7048;A61P3/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本研究不同于以往的其它研究，應用生物學方法探討梓醇提取物對2型糖尿病治療的作用機制。以骨骼肌細胞作為實驗對象，構建阻斷P13/Akt信號通路的實驗組，再給予梓醇提取物，分析肝細胞相關糖類基因表達，探討梓醇提取物對2型糖尿病治療的細胞機制。目前，本項研究國內外尚未見報道。所以梓醇提取物提供了一個新穎的治療方法。用此方法可節省許多購買db/db小鼠和雙基因敲除小鼠的經費問題。本研究通過測定胰島素受體底物P?IRS?1的蛋白表達水平，再則探測梓醇提取物對小鼠成肌細胞株(C2C12)胰島素敏感性的影響，為2型糖尿病的治療提供理論依據。

技術領域

梓醇提取物對肥胖相關疾病(如2型糖尿病)治療領域，尤其涉及驗證梓醇提取物對2型糖尿病治療的可行性。

背景技術

由于人類生存環境以及生活模式的巨大改變，使得糖尿病發病率逐年上升。成為繼心血管疾病和腫瘤之后的第三大非傳染性疾病。近年來糖尿病的發病率上升趨勢明顯，在糖尿病患者中，II型糖尿病占95％以上，II型糖尿病由多個基因及環境因素綜合引起，有很強的遺傳易感性，胰島素抵抗和胰島β細胞功能減退是II型糖尿病的主要發病機制。

當前，國際上對2型糖尿病的治療方法包括心理治療、養生治療、運動治療，而科學家們的著重點仍然在于藥物治療。目前，常用糖尿病治療藥物主要包括磺脲類、雙胍類、葡萄糖苷酶抑制劑、胰島素增敏劑等口服降糖藥和注射用胰島素，然而這些藥物易導致患者低血糖及體重增加，個別還會引發過敏反應或血細胞減少等不良反應，因此，開發既具有降血糖作用又對人體無毒或者微毒的天然產物及其有效成分是當務之急。

梓醇作為一種小分子的天然化合物，主要存在于地黃等常用藥材中。在我國，含梓醇的植物資源相當豐富，這為梓醇新藥開發提供了資源保證。

梓醇提取物具有降低糖尿病小鼠血糖的作用。這可能與它可增強骨骼肌對葡萄糖的攝取、增加肝糖原的合成、減少小腸對葡萄糖的吸收、改善IR等藥理作用有關，但其作用機制仍需進一步研究，通過測定胰島素受體底物P-IRS-1的蛋白表達水平，再則探測梓醇提取物對小鼠成肌細胞株(C2C12)胰島素敏感性的影響，為2型糖尿病的治療提供理論依據。

目前，國內外證實梓醇提取物效果及作用機制是采用野生型、Adipor1-/-、Adipor2-/-、Adipor1-/-Adipor2-/-雙敲除小鼠和db/db小鼠做對照實驗，通過檢測各傳導通路活性、相關基因檢測，驗證梓醇提取物對2型糖尿病的改善作用。梓醇提取物顯著降低了甘油三酸酯含量和氧化應激，減少編碼促炎細胞因子基因的表達水平。其中Adipor1-/-、Adipor2-/-、Adipor1-/-Adipor2-/-雙敲除小鼠和db/db小鼠來源少、價格昂貴，不適實合實驗室推廣。我們采用的是廉價的C57BL/6小鼠，通過梓醇提取物對AMPK所介導的信號通路影響檢測來達到同樣的效果，適合實驗室推廣。

發明內容

為了克服Adipor1-/-、Adipor2-/-、Adipor1-/-Adipor2-/-雙敲除小鼠和db/db小鼠動物模型難以實現問題，本發明提前構建2型糖尿病小鼠模型，進一步對小鼠進行各項指標檢測。組織學水平，對比觀察普通小鼠對照組(NC)、II型糖尿病小鼠組(DM)、給低劑量梓醇提取物小鼠組(DM+L)、給高劑量梓醇提取物小鼠組(DM+H)的組織特征；細胞水平，梓醇提取物改善C2C12細胞胰島素敏感性；分子水平，對各組小鼠血清中相關指標進行生化檢測，重點監測肝臟中各項相應指標含量，測定各組小鼠血胰島素含量；基因水平，檢測肝臟中糖代謝相關酶PEPCK mRNA，C2C12細胞中GLUT4 mRNA表達的測定；綜合檢測梓醇提取物對PI3K/Akt信號通路影響。

本發明通過構建2型糖尿病小鼠模型克服了β細胞基因敲除小鼠的高成本問題，簡化了驗證梓醇提取物對肥胖相關疾病(如2型糖尿病)治療效果實驗。為梓醇提取物療效的驗證性實驗提供一種新型、簡便的方法與系統，一定程度上推動梓醇提取物開發和臨床治療的進展，具有良好的推廣性和可行性。

具體實施方式