[發明專利]一種基于仿貽貝化學構建電化學免疫傳感器的制備方法

在審

• 申請號: 201911063449.1
• 申請日: 2019-11-04
• 公開（公告）號: CN110596407A
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 陳厚;王娜;柏良久;王文香;趙曉青;范德超;楊華偉;魏東磊
• 申請（專利權）人: 魯東大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;G01N27/26;G01N27/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于仿貽貝化學構建電化學免疫傳感器的制備方法，并將其構建電化學免疫傳感器的方法，其特征步驟如下：

（1）利用用仿貽貝化學和表面引發原子轉移自由基聚合技術設計納米復合探針：

首先利用仿貽貝化學改性多壁碳納米管：將多壁碳納米管（MWCNTs）溶于乙醇和蒸餾水的混合溶液中超聲分散，然后在磁力攪拌下加入鹽酸多巴胺（DA），攪拌一段時間后，將Tris緩沖液逐滴加入到反應體系中反應，最后，用乙醇和蒸餾水洗凈離心分離得到產物MWCNTs@PDA，

將上述所得的MWCNTs@PDA分散于無水二氯甲烷（DCM）中超聲，然后加入4-二甲基氨基吡啶（DMAP）和溴苯乙酸（BPA），在冰浴攪拌下，二環己基碳二亞胺（DCC）溶解到DCM中，用恒壓滴液漏斗逐滴加入到圓底燒瓶中，反應體系的溫度逐漸升高至室溫，反應一定時間之后，通過離心洗滌收集產物MWCNTs@PDA-Br，

所述反應溶劑：無水二氯甲烷，酯化反應催化劑：4-二甲基氨基吡啶，

反應中的失水劑：二環己基碳二亞胺，所述反應溫度：15~35攝氏度，

所述反應時間：4-24小時；

其次，利用表面引發PET-ATRP技術在MWCNTs@PDA-Br表面接枝功能聚合物刷，在支口瓶中制備由甲基丙烯酸縮水甘油酯（GMA），MWCNTs@PDA-Br，曙紅Y（EY），三乙胺（TEA），α-溴苯乙酸乙酯（EBPA）和N,N-二甲基甲酰胺（DMF）組成的反應混合物，通過給反應物充N₂以達到不含氧的N₂氣氛，然后將混合物轉移到含有LED柔性條帶的磁力驅動攪拌裝置中，反應需在室溫下過夜進行，將反應完成的混合物溶解在DMF中，沉淀至大量的甲醇溶液中，離心收集后進行透析處理，然后冷凍干燥得到產物MWCNTs@PDA-PGMA，

所述PET-ATRP引發劑為：MWCNTs@PDA-Br，所述光催化劑為：曙紅Y，

單體：甲基丙烯酸縮水甘油酯，犧牲引發劑：α-溴苯乙酸乙酯，

還原劑：三乙胺，溶劑：N，N-二甲基甲酰胺；

最后，利用所得的MWCNTs@PDA-PGMA制備功能化納米復合探針，對MWCNTs@PDA-PGMA功能性聚合物刷進行乙二胺（EDA）改性，將功能性PGMA聚合物刷置于含有EDA的燒瓶中，攪拌一段時間后離心洗滌，得到最終的產物，

其中，所述反應溫度：50~55攝氏度，

所述反應時間：24小時，

之后，對其接枝兩種信號分子蒽醌-2-羧酸和甲酸二茂鐵，首先將信號分子置于磷酸鹽緩沖溶液中充分分散，加入二環己基碳二亞胺（DCC）/4-二甲基氨基吡啶（DMAP）活化試劑來活化信號分子的羧基，室溫下反應，然后與乙二胺改性的聚合物刷混合，室溫反應24小時，后離心處理并凍干制成納米探針，

其中，所述反應溫度：20-30攝氏度，羧基的催化試劑：4-二甲基氨基吡啶（DMAP），脫水縮合劑：二環己基碳二亞胺（DCC），溶劑：磷酸鹽緩沖溶液；

（2）將（1）得到的納米復合探針（MWCNTs@PDA-PGMA-Aq/Fc）將與癌胚抗原（CEA）和甲胎蛋白（AFP）的抗體2在一定溫度下震蕩箱中反應2小時，然后將玻碳電極打磨，經抗體1（CEA+AFP）、牛血清蛋白（BSA）、抗原（CEA+AFP）、復合探針組裝后，進行電化學測試，利用上述方法制備功能化納米復合探針應用于免疫傳感器實現腫瘤標志物CEA和AFP的超靈敏檢測，對腫瘤標志物檢測實現信號的指數級放大，

其中所述BSA濃度：百分之零~百分之二，CEA抗原濃度:163飛克/毫升~163納克/毫升，AFP抗原濃度：100飛克/毫升~100納克/毫升。

2.應用上述制備工藝制得的聚合物刷基納米復合探針。