[發明專利]一種非洲豬瘟免疫系統靶向基因工程疫苗

有效

• 申請號: 201911062920.5
• 申請日: 2019-10-31
• 公開（公告）號: CN110760006B
• 公開（公告）日: 2023-09-29
• 發明（設計）人: 畢勝利;王云龍;殷宏;常慧蕓;范雪亭;李玉林;伊瑤;張怡青;王繼創;宋長緒;王國強
• 申請（專利權）人: 河南省生物工程技術研究中心;鄭州倍賽泰生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C07K16/08;G01N33/569;C12N15/70;A61K39/187;A61P31/20;C12R1/19
• 代理公司: 鄭州銘晟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 41134
• 代理人: 張鵬

本發明屬于疫苗技術領域，具體涉及一種非洲豬瘟免疫系統靶向基因工程疫苗。該非洲豬瘟免疫系統靶向基因工程疫苗的主要原料為非洲豬瘟融合蛋白，本發明的非洲豬瘟融合蛋白包括選自p72蛋白的片段、選自p54蛋白的片段和選自p30蛋白的片段；所述選自p72蛋白的片段至少包括如SEQ?ID?NO.1所示的序列，所述選自p54蛋白的片段至少包括如SEQ?ID?NO.2所示的序列，所述選自p30蛋白的片段至少包括如SEQ?ID?NO.3所示的序列。該非洲豬瘟融合蛋白具有免疫效果好等優點。

技術領域

本發明屬于疫苗技術領域，具體涉及一種非洲豬瘟免疫系統靶向基因工程疫苗。

背景技術

非洲豬瘟(ASF)自2018年8月傳入我國，現已嚴重影響了畜牧業的發展和人民的生活。該病從1921年被發現至今近百年，但目前全球尚無獲批疫苗和特效藥。隨著現代生物學的發展，ASF疫苗研發取得了較大的研究進展。鑒于現有的研究，開發有效的滅活ASF疫苗似乎不太可能。現研發方向主要集中在減毒疫苗、病毒活載體疫苗、亞單位疫苗以及核酸疫苗等。

減毒活疫苗具有能有效激活機體免疫系統的優點，主要分為傳統減毒和重組減毒活疫苗，但這兩類疫苗都存著毒力返強的可能性，均不是高安全性的首選；尤其是傳統減毒活疫苗，如使用不當可能會衍生出新的強毒。核酸疫苗可產生持久性的免疫應答，但目前安全性及有效性無法保證。病毒活載體疫苗相對于減毒活疫苗雖較安全，但現階段還缺乏對其長期安全性、有效性的研究，且活載體疫苗多采用細胞表達，成本高。

亞單位苗包括：傳統方式是采用微生物培養后用物理和化學方法提取有效抗原成分制成疫苗；現代生物學方法是將病原的基因和蛋白進行分析后，利用基因工程技術將病原保護性抗原基因序列插入合適的表達質粒，高效穩定表達，生產抗原制成亞單位疫苗。亞單位疫苗是公認最安全的疫苗，但ASFV編碼多達170種蛋白質，因此很難選擇可誘導保護的抗原，目前已經研究報道了幾種ASFV蛋白是ASFV的中和位點，并對這些蛋白質的免疫保護能力做了測試。但由于不能很好地刺激細胞免疫以及中和位點中多個空間構象難以保持正確形態的問題，效果均不理想。

非洲豬瘟疫苗研發的難點在于病毒基因組大，蛋白多，結構復雜，難大規模培養，傳代易變異，病毒免疫逃逸機制不清，且毒株使用對研究硬件要求高。截至2019年9月1日，國內除農業部下屬的哈爾濱獸醫研究所有條件進行減毒、基因缺失苗的研發外，其他研究機構均缺少必要的研究硬件，亞單位苗的研發成為其他團隊唯一可行的選擇。而非洲豬瘟亞單位苗研發的難點在于如何有效的激活豬的細胞免疫、產生高水平的中和抗體并避免某些抗體加速病毒感染(ADE效應)。

文獻《Neutralizing?antibodies?to?African?swine?fever?virus?proteinsp30,p54,and?p72?are?not?sufficient?for?antibody-mediated?protection》J.G.Neilan等，《Virology》319(2004),P337-342)公開了用桿狀病毒表達致病性ASFVPr4株的p30、p54、p72和p22蛋白免疫豬，在免疫組動物中檢測到ASFV特異性中和抗體，但用104TCID50劑量的Pr4攻毒，免疫組和對照組的所有動物在7-10DPI之間死亡，表明針對上述蛋白的中和抗體不足以進行抗體介導的保護。

中國專利文獻CN?103172749A公開了一種非洲豬瘟蛋白工程疫苗的制備，該非洲豬瘟蛋白工程疫苗通過利用基因重組技術，將非洲豬瘟重要結構蛋白p72、p54以及紅細胞凝集素HA多個T細胞表位和純化標簽串聯，并克隆入載體，轉化宿主菌，經過發酵，純化、乳化工藝制備得到具有細胞免疫和體液免疫效果的非洲豬瘟蛋白工程疫苗，用于非洲豬瘟疫情的防控。該蛋白不含有目前主流研究公認的重要抗原P30，在免疫時，理論上存在保護抗體譜窄的問題。另外，重組蛋白對體液免疫刺激不足的問題也沒有通過設計進行解決，存在一免后抗體效價較低的問題。

發明內容