[發明專利]γ干擾素誘導單核細胞蛋白在血清中表達量的檢測方法及應用

在審

• 申請號: 201911062065.8
• 申請日: 2019-11-01
• 公開（公告）號: CN112782407A
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 左建宏;艾小紅;朱小茜;陳榮如
• 申請（專利權）人: 南華大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/574
• 代理公司: 衡陽市科航專利事務所(普通合伙) 43101
• 代理人: 張衛衡

一種γ干擾素誘導單核細胞蛋白在血清中表達量的檢測方法及應用，一種γ干擾素誘導單核細胞蛋白在血清中表達量的檢測方法包括如下步驟：采集血清樣本、設置零孔、在標準品孔及樣本孔中加入標準品及血清、每孔加入生物素標記抗體工作液、將板內液體甩干后加液、將板內液體甩干后在其余每孔中加入TMB顯色液、在其余每孔中加入終止液、用酶標儀測量板內各孔OD值、計算出三種蛋白濃度。MIG對于喉癌的發生有著重要意義，可為喉癌診斷提供重要依據，可彌補內鏡和影像學檢查的不足，減少有創檢查，提高喉癌診斷的靈敏度與特異度。

技術領域

本發明涉及一種檢測方法及應用，特別是一種γ干擾素誘導單核細胞蛋白在血清中表達量的檢測方法及應用。

背景技術

喉癌是頭頸部的常見惡性腫瘤之一，影響喉癌的發生因素很多，主要的影響因素為吸煙和飲酒，它的早期沒有特異性的臨床表現，有患者僅可表現為聲音嘶啞，咽喉部異物感等癥狀，不易引起患者重視。由于喉部在呼吸和發聲方面的重要功能，喉癌可嚴重影響患者的日常生活。

現階段研究中發現許多與喉癌密切相關的標志物，例如血清腫瘤標志物Cyfra21-1,CA724,CA199,SCCAg,TK1等，但是都缺乏高度特異性及敏感度而無法在臨床上進行廣泛推廣。需要更多的研究來確定新的基于血清的腫瘤標志物，這些腫瘤標志物可能被用于篩查喉癌早期診斷的一般或高危人群，或預測CRC的預后和治療反應，因此對喉癌腫瘤標志物的尋找有非常大的臨床應用價值，是現今喉癌診斷研究的重點和熱門。

發明內容

本發明的目的是提供一種γ干擾素誘導單核細胞蛋白在血清中表達量的檢測方法。

實現本發明上述目的的技術方案是：一種γ干擾素誘導單核細胞蛋白在血清中表達量的檢測方法，包括如下步驟：

一、采集血清樣本；

二、按照樣本量設置零孔，TMB顯色孔，標準品孔及樣本孔，并標識；

三、用移液槍分別在標準品孔及樣本孔中加入標準品及血清100ul，注意不要碰觸到孔壁和孔底,蓋上板貼，至37℃恒溫箱中孵育2h。

四、標準品孔及樣本孔中每孔加入生物素標記抗體工作液100 ul，注意不要碰觸到孔壁和孔底，蓋上新板貼，放置于37℃恒溫箱中，靜置1 h；

五、將板內液體甩干，孔內未見明顯附壁水滴，洗板3次，每孔加入洗液工作液200ul，浸泡2min。洗板后在濾紙上拍干，可見孔壁和孔底未見明顯附壁水滴；

六、用移液槍分別在先前設置的標準品孔及樣本孔中加液，每孔加入過氧化物酶標記親和素工作液100 ul，注意不要碰觸到孔壁和孔底。蓋上新板貼，置于恒溫箱中，溫度恒定37℃，靜置1 h；

七、將板內液體甩干，孔內未見明顯附壁水滴，洗板5次，每孔加入洗液工作液200ul，浸泡2min。洗板后在濾紙上拍干，可見孔壁和孔底未見明顯附壁水滴；

八、除空白孔外，用移液槍在其余每孔中加入TMB顯色液90ul，注意不要碰觸到孔壁和孔底，在37℃恒溫箱中避光顯色25min；

九、看到標準品孔中有明顯顏色反應后。除空白孔外，在其余每孔中加入終止液50ul；

十、加入終止液后可見孔內液體轉為黃色，觀察到反應后5min內，用酶標儀測量板內各孔OD值，設定測量波長為450nm；

十一、計算出三種蛋白濃度。

本發明實驗所用的ELISA法檢測MIG檢測試劑盒由上海華美生物有限公司提供。