[發明專利]一種獲得腫瘤特異性T細胞的設備和方法

在審

• 申請號: 201911059673.3
• 申請日: 2019-10-28
• 公開（公告）號: CN110628621A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 李鵬;林首恒;程琳;王素娜;吳綺婷;龍有國;姚瑤;林思妙
• 申請（專利權）人: 合肥中科干細胞再生醫學有限公司
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M3/04;C12M1/36;C12M1/12;C12M1/22;C12M1/02;C12N5/0783;C12N5/09
• 代理公司: 11332 北京品源專利代理有限公司
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供一種獲得腫瘤特異性T細胞的設備，所述設備包括第一培養裝置和第二培養裝置，所述第一培養裝置和所述第二培養裝置分別獨立地通過管道與第一閥門和第二閥門相連，所述第一閥門與第一微流控裝置相連，所述第二閥門與第二微流控裝置相連。所述設備和方法基于微流控系統的細胞培養體系，使得T細胞能充分與腫瘤抗原接觸從而提高腫瘤特異性T細胞的活化，同時利用液體流控避免T細胞與腫瘤長時間接觸而受到免疫抑制，從而使腫瘤特異性T細胞更好的擴增；此技術無需使用患者的原代APC細胞，能有效降低成本，提高重復性和培養的標準化。

技術領域

本發明屬于細胞生物學領域，涉及一種擴增T細胞的設備，尤其涉及一種獲得腫瘤特異性T細胞的設備和方法。

背景技術

T細胞活化需要兩個信號的刺激。其中，T細胞活化的第一信號由T細胞表面TCR-CD3復合體與抗原提呈細胞(APC)表面抗原肽-MHC分子復合物結合而組成。活化后的T細胞能特異識別具有相同表面抗原肽-MHC分子復合物的靶細胞，發揮殺傷作用。但腫瘤細胞可以通過下調表達MHC分子，使得T細胞無法充分活化，從而達到免疫逃逸的目的。同時，腫瘤組織具有高度的異質性，不同腫瘤患者、同一腫瘤患者不同病灶、乃至同一病灶不同腫瘤細胞均可能具有不同的分子特征。針對單一靶點的腫瘤特異性T細胞在遇到異質性腫瘤細胞群后，針對不同靶點的T細胞難以接受足夠的刺激，啟動對腫瘤的殺傷。

而T細胞活化的第二信號，由T細胞表面的共刺激分子(如CD28、CD137、CD134等)與抗原提呈細胞相應配體(如B7、CD137L、CD134L等)結合來提供，能增強T細胞的增殖與存活能力。然而，腫瘤細胞一般不能提供T細胞第二信號的刺激源，而在腫瘤部位具有正常功能的抗原提呈細胞的數量又有限，所以T細胞第二信號的刺激源整體匱乏。同時，腫瘤細胞及其基質細胞還能通過分泌一些抑制免疫的因子(如TGFβ、VEGF、IDO)形成免疫抑制的環境或通過直接接觸(如上調腫瘤表面PDL-1，結合到T細胞表面PD-1上，誘導T細胞凋亡)，使T細胞失活。對腫瘤內部的腫瘤特異性T細胞發揮功能造成障礙。

目前擴增T細胞的方法主要依靠MHC配對的抗原提呈細胞(APC)和外源性生長因子，如白介素2(IL-2)聯合CD3抗體用于刺激T細胞的增殖，擴增的T細胞主要是CD8陽性T細胞亞群。但使用傳統方法獲得臨床治療量的抗原特異性T細胞往往需要在培養過程中多次活化和擴增，這一過程中APC的來源無法很好地保證，需投入大量人力，既耗時，成本又高，且重復性差，無法標準化培養。

目前體外培養產生有腫瘤治療效果的抗原特異性T細胞技術還遠未成熟。因此，改進抗原特異性T細胞克隆的擴增方法是非常必要的。在改善抗原特異T細胞的抗腫瘤功能的同時簡化抗原特異性T細胞的產出程序無論是提高臨床治療的效果還是細胞產出的標準化都具有重要的意義。

發明內容

針對現有技術中存在的技術問題，本發明提供一種獲得腫瘤特異性T細胞的設備和方法，所述設備和方法基于微流控系統的細胞培養體系，使得T細胞能充分與腫瘤抗原接觸從而提高腫瘤特異性T細胞的活化，同時利用液體流控避免T細胞與腫瘤長時間接觸而受到免疫抑制，從而使腫瘤特異性T細胞更好的擴增；此技術無需使用患者的原代APC細胞，能有效降低成本，提高重復性和培養的標準化。

為達上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明目的之一在于提供一種獲得腫瘤特異性T細胞的設備，所述設備包括第一培養裝置和第二培養裝置，所述第一培養裝置和所述第二培養裝置分別獨立地通過管道與第一閥門和第二閥門相連，所述第一閥門與第一微流控裝置相連，所述第二閥門與第二微流控裝置相連。

作為本發明優選的技術方案，所述第一培養裝置與所述第二閥門間的管道入口設置有第一過濾組件。

作為本發明優選的技術方案，所述第一培養裝置與所述第二閥門間的管道入口設置有第二過濾組件。

作為本發明優選的技術方案，所述第二培養裝置包括攪拌組件。