[發(fā)明專利]一種高效表達豬瘟E2蛋白的重組桿狀病毒及其構建方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201911057421.7 | 申請日： | 2019-11-01 |
| 公開（公告）號： | CN110747215A | 公開（公告）日： | 2020-02-04 |
| 發(fā)明（設計）人： | 劉喜鳳;郭兆隆;楊施瑜;鄭杰;馬寧寧 | 申請（專利權）人： | 北京鼎持生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/62 | 分類號： | C12N15/62;C12N15/866;C12N15/66;C12N7/01 |
| 代理公司： | 11641 北京金宏來專利代理事務所(特殊普通合伙) | 代理人： | 左海明 |
| 地址： | 100176 北京市北京經濟*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組桿狀病毒 構建 桿粒 堿基 人白蛋白信號肽序列 重組桿狀病毒表達 轉染昆蟲細胞 翻譯增強子 細胞破碎液 亞單位疫苗 豬瘟E2蛋白 方便檢測 高效表達 高效分泌 序列連接 表達量 跨膜區(qū) 糖基化 折疊 豬瘟 研發(fā) 制備 分泌 合成 轉化 | ||
1.一段人工合成的基因序列，其特征在于，所述基因序列含有一段富含AT堿基的翻譯增強子序列TE21，一段人白蛋白信號肽序列S，不含跨膜區(qū)的E2序列以及6個組氨酸的6his序列，該序列如SEQ ID NO.1所示，該序列命名為TE21-S-E2-6His。
2.根據權利要求1所述的一段人工基因合成的基因序列，其特征在于，所述增強子序列TE21如SEQ ID NO.2所示，所述信號肽序列S如SEQ ID NO.4所示。
3.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體通過XhoI和KpnI酶切序列TE21-S-E2-6His以及載體pFastbac-dual，回收連接片段，并經篩選驗證克隆構建而成，該表達載體命名為TE21-S-E2-6His-pFastbac-dual。
4.一種高效表達豬瘟E2蛋白的重組桿狀病毒，其特征在于，所述重組桿狀病毒經載有權利要求1所述的基因序列的質粒轉染，命名為TE21-S-E2-rBV株，于2019年9月19日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.18508。
5.一種如權利要求4所述的高效表達豬瘟E2蛋白的重組桿狀病毒的構建方法，其特征在于，包括以下步驟，(1)人工合成權利要求1所述的TE21-S-E2-6His序列；
(2)XhoI和KpnI酶切TE21-S-E2-6his序列和pFastbac-dual載體序列，回收片段syn-signal-E2-6his和pFastbac-dual，連接、轉化、克隆測序驗證，構建TE21-S-E2-6his-pFastdual表達載體；
(3)將TE21-S-E2-6his-pFastbac-dual表達載體轉化DH10Bac，通過藍白斑篩選以及PCR鑒定獲得重組桿粒TE21-S-E2-6his-rBacmid；
(4)將重組桿粒TE21-S-E2-6his-rBacmid轉染SF9細胞，收毒，重組桿毒傳代培養(yǎng)，獲得能夠高效表達豬瘟E2蛋白的重組桿狀病毒，命名為TE21-S-E2-rBV株。
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