[發(fā)明專利]一種利用反相色譜分離分析左西孟旦中右西孟旦的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201911053264.2
• 申請日: 2019-10-31
• 公開（公告）號: CN111474289A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張曉斌
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢嘉諾康醫(yī)藥技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/60
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 余曉雪

本發(fā)明涉及色譜分析方法技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種利用反相色譜分離分析左西孟旦中右西孟旦的方法。其步驟如下：a.用磷酸緩沖液與乙腈混合液配置待測溶液；b.將待測溶液注入到以在烷基硅烷鍵合硅膠表面涂敷多糖衍生物的手性填充劑為固定相的高效液相色譜儀中，用流動相進(jìn)行沖洗；c.使用波長為200～400nm的紫外光檢測。本發(fā)明首次使用反相色譜手性分離方法進(jìn)行了左西孟旦的手性分析，填補(bǔ)了技術(shù)空白；并且使用到了以下流動相：水、甲醇或乙腈，磷酸鹽，這些試劑常見且便宜，揮發(fā)性差，操作簡單，分離時間短，靈敏度高，分離效果好，對環(huán)境污染小，運(yùn)行穩(wěn)定，對儀器不造成損傷，具有良好的實用性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及色譜分析方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用反相色譜分離分析左西孟旦中右西孟旦的方法。

背景技術(shù)

左西孟旦：(R)–[[4–(1，4，5，6–四氫–4–甲基–6–氧代–3–噠嗪基)苯基]–亞肼基]–丙二腈，分子式為：C₁₄H₁₂N₆O分子量為280.28。

右西孟旦：(S)–[[4–(1，4，5，6–四氫–4–甲基–6–氧代–3–噠嗪基)苯基]–亞肼基]–丙二腈，分子式為：C₁₄H₁₂N₆O分子量為280.28。

左西孟旦是由芬蘭Orion公司研究開發(fā)，并于2000年在瑞典首次以商品名“Simdax”上市，作為一種鈣增敏劑，是一種新型的心力衰竭治療藥物，臨床主要用于充血性心衰的治療。作用機(jī)理是以鈣離子濃度依賴的方式與心肌肌鈣蛋白C結(jié)合而產(chǎn)生正性肌力作用，增強(qiáng)心肌收縮力，但并不影響心室舒張；同時本品可通過使ATP敏感的K+通道(KATP)開放而產(chǎn)生血管舒張作用，使得冠狀動脈阻力血管和靜脈容量血管舒張，從而改善冠脈的血流供應(yīng)，另外它還可抑制磷酸二酯酶Ⅲ。臨床數(shù)據(jù)證明：在心衰患者中，左西孟旦的正性肌力和擴(kuò)血管作用可以使心肌收縮力增強(qiáng)，降低前后負(fù)荷，而不影響其舒張功能。

近年來由于對映體之間的藥效學(xué)，藥代動力學(xué)和毒理學(xué)差異的證據(jù)越來越多，立體化學(xué)現(xiàn)在已成為藥物研究和開發(fā)中的關(guān)鍵問題。由于手性的分析方法能夠?qū)⒒瘜W(xué)活性物質(zhì)與其對映異構(gòu)體分離，有利于確定其結(jié)構(gòu)和具體含量，因此手性HPLC方法是開發(fā)高質(zhì)量制造工藝和質(zhì)量控制方法的關(guān)鍵步驟。

左西孟旦有一個手性中心，并且從上市資料看，其有效成分是R構(gòu)型，因此在合成階段檢測控制S構(gòu)型的異構(gòu)體，對控制成品的質(zhì)量至關(guān)重要。

現(xiàn)有的手性分離一般分為正相色譜和反相色譜兩種。正相色譜是流動相極性比色譜柱極性小，正相色譜的常用流動相是正己烷，正庚烷，甲基叔丁基醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇等，易揮發(fā)，成本高；反相色譜是流動相極性比色譜柱極性大，反相色譜的常用流動相是水，甲醇，乙腈等，不易揮發(fā)，成本較低。

查閱現(xiàn)有文獻(xiàn)，雖然該藥已經(jīng)上市19年，但是尚未進(jìn)入各國藥典，無法定的手性分析方法可以參考。查閱國內(nèi)外的文獻(xiàn)，僅有兩篇國外的文獻(xiàn)使用了正相色譜的手性分離技術(shù)對左西孟旦和右西孟旦進(jìn)行分離，但是使用到了大量的色譜級甲基叔丁基醚、乙醇、異丙醇或三氟乙酸等強(qiáng)揮發(fā)性有機(jī)試劑，價格昂貴、毒性大、易揮發(fā)、空氣污染大、吸入人體后對人體傷害比較大并且對環(huán)境也不友好；且儀器需要從反相系統(tǒng)切換到正相系統(tǒng)消耗時間大約3小時，操作繁瑣，一旦失誤，對色譜儀器傷害比較大，也會對昂貴的手性色譜柱會造成難以逆轉(zhuǎn)的傷害，而且正相溶劑對儀器的傷害比較大，長期使用會造成管路老化，密封墊圈損壞，流動相泄露。

因此急需要建立一種靈敏度高、分離效果好的反相手性色譜方法進(jìn)行分離。

發(fā)明內(nèi)容

為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足、填補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)空白，本發(fā)明提供了一種利用反相高效液相色譜分離分析左西孟旦中右西孟旦的方法，可以準(zhǔn)確測定左西孟旦中右西孟旦的含量。