[發明專利]一種定性檢測人血清中鮑曼不動桿菌特異性抗體的檢測條

有效

• 申請號: 201911052203.4
• 申請日: 2019-10-31
• 公開（公告）號: CN110713523B
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 楊波;胡征;王毅
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學
• 主分類號: C07K14/21
• 分類號: C07K14/21;C12N15/31;G01N33/543;G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 余曉雪

本發明涉及一種一種定性檢測人血清中鮑曼不動桿菌特異性抗體的檢測條。該檢測條由樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊、PVC板組成。結合墊上噴涂有彩色乳膠微球偶聯的鼠抗人IgG單克隆抗體，硝酸纖維素膜上包被有鮑曼不動桿菌融合抗原的檢測線和羊抗鼠IgG多克隆抗體的質控線。當加入的樣品中含有鮑曼不動桿菌抗體時，鮑曼不動桿菌抗體首先與乳膠?鼠抗人IgG單克隆抗體形成復合物，在毛細作用下遷移至包被有鮑曼不動桿菌融合抗原的檢測線時被捕捉，檢測線呈相應的彩色，因而可檢測樣品中是否含有鮑曼不動桿菌抗體。該檢測條具有快速、簡捷、靈敏度高，特異性好，假陽性低的優點，能在十分鐘之內得到明確的結果，有效用于鮑曼不動桿菌感染的輔助診斷。

技術領域

本發明屬于生物工程和免疫學領域，具體涉及一種定性檢測人血清中鮑曼不動桿菌特異性抗體的檢測條及其制備方法。

背景技術

鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii，Ab)為非發酵革蘭陰性桿菌。該菌是醫院感染的重要病原菌，主要引起呼吸道感染，也可引發菌血癥、泌尿系感染、繼發性腦膜炎、手術部位感染、呼吸機相關性肺炎等。對常用抗生素的耐藥率有逐年增加的趨勢，并引起臨床醫生和微生物學者的嚴重關注。國內資料表明，A.baumannii約占臨床分離的不動桿菌的70％以上。A.baumannii對第三代和第四代頭孢菌素的耐藥率已達63.0％～89.9％。對四種氨基糖苷類(阿米卡星、慶大酶素、奈替米星、妥布霉素)和環丙沙星的耐藥率菌達96.3％。我國目前的絕大多數菌株對亞胺培南、美羅培南、頭孢派酮/舒巴坦和多黏菌素B保持敏感，但在呼吸道感染的治療中效果較差。綜上所述，鑒于近年鮑曼不動桿菌的耐藥率有進一步上升的趨勢，這應當引起臨床醫師及微生物界的高度重視。臨床醫師應重視獲得性鮑曼不動桿菌感染，與臨床微生物實驗室密切協作，加強感染的監測，有效預防和控制感染。

目前檢測呼吸道中該病原體的方法主要以傳統方法為主，即分離鑒定法，該方法所需時間長，一般要2-3天，很難滿足快速鑒定的需要；近幾年發展起來的PCR技術，是一種快速、靈敏、特異性好的技術，但是目前該技術還是依賴于傳統方法的前增菌步驟，而增菌液中往往還有PCR抑制劑，從而影響擴增的效果，假陽性也是該法的一個突出缺點。同時，該技術還需要專業的檢測設備，不適合進行床旁檢測。以抗體為診斷標的的免疫學檢測已成為人體病原微生物感染檢測不可或缺的重要技術手段。目前已發展了多種特異性免疫檢測技術，如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、熒光免疫分析(FIA)、化學發光免疫分析(CIA)、免疫沉淀反應、免疫凝集反應、ELISA檢測試劑盒、免疫膠體金試紙條、免疫乳膠檢測試劑等。其中免疫乳膠試紙條等多種以抗原抗體為基礎的免疫學檢測技術，以其簡便、快速、靈敏、準確、實用的特點已成為病原微生物檢測不可或缺的重要手段。因而，研究開發具有自主知識產權的病原微生物的標志性抗原，是開發擁有自主知識產權的ELISA、乳膠微球免疫層析等進行病原體抗體檢測的方法的基礎。

抗原的制備是抗體檢測特異性的關鍵。本研究選用具有種間特異性的表面蛋白fhuE receptor、OmpA及PilF等作為抗原標的，制備特異性良好的融合抗原，并將其應用于制備鮑曼不動桿菌抗體乳膠微球免疫層析檢測條。

發明內容

本發明的目的是以融合抗原為基礎，通過免疫乳膠標記技術研制一種操作簡單、成本低廉、快捷迅速的定性檢測人血清中鮑曼不動桿菌特異性抗體的檢測條。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種定性檢測人血清中鮑曼不動桿菌特異性抗體的檢測條的制備方法，其特征在于：所述定性檢測人血清中鮑曼不動桿菌特異性抗體的檢測條的制備方法包括以下步驟：

1)鮑曼不動桿菌融合抗原(Fhue+OmpA+Pilf)的制備：

分別獲取鮑曼不動桿菌表面蛋白Fhue、表面蛋白OmpA及表面蛋白Pilf的胞外結構域中抗原表位最為豐富的肽段并找到該肽段基因編碼序列，優化該肽段基因編碼序列，并將此三段基因序列用兩段柔性連接肽的編碼序列進行連接，形成融合基因；