[發明專利]一種魚肉腐敗菌氨基酸脫羧能力的檢測方法

有效

• 申請號: 201911050898.2
• 申請日: 2019-10-31
• 公開（公告）號: CN110699417B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 羅永康;莊帥;洪惠
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N30/88;C12R1/38;C12R1/01
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種魚肉腐敗菌氨基酸脫羧能力的檢測方法，其特征在于，包括：用磷酸鹽緩沖液溶解待測氨基酸底物配制得到待測氨基酸的底物溶液，將含待測腐敗菌的菌懸液加入到所述待測氨基酸的底物溶液中作為評價組，將含待測腐敗菌的菌懸液加入到磷酸鹽緩沖液中作為對照組，將無菌生理鹽水加入到所述待測氨基酸的底物溶液中作為空白組，分別在相同條件下培養并提取評價組、對照組和空白組的生物胺，檢測得到生物胺濃度C_評價、C_對照和C_空白，計算得到腐敗菌對待測氨基酸的脫羧能力；

所述生物胺濃度的檢測采用HPLC法；

所述培養的溫度為30-35℃；

所述培養的時間為48-60h；

所述待測氨基酸的底物溶液的配制具體包括，用0.045M、pH7.50的磷酸鹽緩沖液溶解得到10.0-15.0mM的待測氨基酸的底物溶液，121℃滅菌15-20min，冷卻后再加入二硫蘇糖醇和磷酸吡哆醛，并控制二硫蘇糖醇和磷酸吡哆醛的終濃度分別為0.5mM和0.05-0.1mM；

所述含待測腐敗菌的菌懸液的配制具體包括，挑取分離純化后的待測腐敗菌單菌落于胰蛋白胨大豆肉湯中，30℃水浴搖瓶培養至肉湯菌落總數達9.0-10.0log CFU/mL，并用無菌生理鹽水調整菌懸液濃度至8.0-9.0log CFU/mL；

所述腐敗菌對待測氨基酸的脫羧能力采用下式計算：

DCA＝(T×V)×(C_評價-C_對照-C_空白)/(M×TVC×t)；

式中：

DCA為腐敗菌氨基酸的脫羧能力，μmol/h；

T為提取生物胺時的稀釋倍數；

V為檢測生物胺時反應體系的總體積；

M為生物胺的分子量，g/mol；

TVC為菌懸液的菌落總數，log CFU/mL；

t為反應時間，h；

所述腐敗菌為Pseudomonas helmanticensis或Shewanella putrefaciens。

2.權利要求1所述的檢測方法在魚肉腐敗菌氨基酸脫羧能力檢測中的應用。