[發明專利]一種制備抗人源TNF-α單克隆抗體的方法及其用途

在審

• 申請號: 201911050452.X
• 申請日: 2019-10-21
• 公開（公告）號: CN112759638A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 李治寰;林立龍;盧佳豪
• 申請（專利權）人: 東莞市恩聯干細胞生物科技研究院
• 主分類號: C07K14/56
• 分類號: C07K14/56;C07K16/28;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
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本發明屬生命科學技術領域，具體為一種單克隆抗體的制備，該抗體可用于ELISA和免疫印跡等生物學研究實驗。本發明還公開了上述單克隆抗體制備的過程以及在ELISA實驗與Westerp blot實驗中的檢測效果。表明該抗體可用于ELISA和免疫印跡等生物學研究實驗。

技術領域

本發明屬生命科學技術領域，具體為一種單克隆抗體的制備，該抗體可用于ELISA和免疫印跡等生物學研究實驗。本發明還公開了上述單克隆抗體制備的過程以及在ELISA實驗與Western blot實驗中的檢測效果。表明該抗體可用于ELISA和免疫印跡等生物學研究實驗。

背景技術

腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)是一類可通過刺激細胞分泌白細胞介素-1誘導某些腫瘤細胞死亡的細胞因子。TNF既是促炎細胞因子又是抗炎細胞因子，對于自身免疫疾病、癌癥和感染性病原體的相關研究和治療具有重要意義。

作為TNF家族中的一員，TNF-α是一個主要由巨噬細胞分泌并主要與TNFRSF1A/TNFR1和TNFRSF1B/TNFBR 結合的細胞因子。編碼TNF-α蛋白的基因位于染色體的6p21.3位置上。最初TNF-α蛋白被鑒定為動物經脂多糖誘導后，血清中產生的引起腫瘤死亡的介質。研究發現，TNF-α異常表達與類風濕性關節炎、銀屑病關節炎和炎性腸病的發展相關，也與乳腺癌、肝癌和皮膚癌的發生有密切聯系。抑制TNF-α活性在這些疾病的治療上取得一定的效果，因此，對于TNF-α的結構、生物學功能的研究及其抑制劑的開發成為炎癥和腫瘤研究的重大課題。

在生物學研究中，抗體被廣泛應用于抗原定性定量分析。其中單克隆抗體可被用于分析抗原的細微結構及檢驗抗原抗體未知的結構關系。新的、高效價比的抗TNF-α單克隆抗體可為TNF-α相關研究提供有效的工具。雜交瘤技術制備鼠源性單克隆抗體是一種非常成熟的抗體制備技術，但也存在制備周期長、成本較高、抗體效價低導致抗體效果不穩定等問題。基于上述局限，本發明使用一種新的TNF-α抗原，采用獨特的雜交瘤技術制備一種高效價的抗TNF-α單克隆抗體。

發明內容

本發明的目的是提供一種單克隆抗體。該抗體為抗人源性TNF-α蛋白的單克隆抗體。

本發明的另一目的是提供制備高效價抗人源性TNF-α蛋白的抗體的制備流程以及方法。

本發明的另一目的是表明用該方法制備的抗TNF-α蛋白的抗體可用于ELISA和免疫印跡等生物學研究實驗。該抗體在ELISA和免疫印跡實驗中有良好的效果。

附圖說明

圖1 TNF-α蛋白與其他蛋白相互作用的信號網絡。

圖2 TNF-α單克隆抗體制備路線圖。

圖3 TNF-α單克隆抗體用于Western blot檢測應用(免疫血清Serum是稀釋10萬倍的上述3次免疫后血清，Isotype是2C11的同型對照抗體)。

圖4 TNF-α單克隆抗體能用于ELISA實驗(免疫血清Serum是稀釋10萬倍的上述3次免疫后血清，Isotype 是2C11的同型對照抗體)。

具體實施方式

1 TNF-α單克隆抗體的制備

生產TNF-α蛋白抗原(發明專利CN201210572674.X)，免疫雌性BALB/c小鼠(6周齡)。首次免疫使用弗氏完全佐劑進行抗原乳化，皮下6點注射，每只小鼠注射的抗原量為100μg。14天后，進行第二次免疫，使用弗氏不完全佐劑乳化抗原，皮下6點注射，每只小鼠注射的抗原量為100μg。14天后，進行第 3次免疫，方法同二次免疫。14天后，對小鼠剪尾采集少量血液進行血清效價ELISA檢測，選擇抗體滴度最高(1∶500000)的小鼠進行加強免疫，無需乳化，通過腹腔注射抗原蛋白，每只小鼠注射100μg。