[發明專利]雜交瘤細胞株6F9、抗體及其應用

有效

• 申請號: 201911050417.8
• 申請日: 2019-10-31
• 公開（公告）號: CN110699327B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 郭志剛;黃子祥;楊洋;李夢晗
• 申請（專利權）人: 浙江藍盾藥業有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/28;C12N15/13;G01N33/68;G01N33/577;A61K39/395;A61P35/00;C12R1/91
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 楊曉莉

本發明屬于生物技術領域，具體公開了一種雜交瘤細胞株6F9、其產生的抗人CD70單克隆抗體及其應用，本發明是以具有生物活性的人CD70重組蛋白為抗原，通過雜交瘤技術篩選制備得到在細胞水平能高親和力結合人CD70特異性單克隆抗體，該抗體在腫瘤免疫治療中具有潛在的價值。

技術領域

本發明屬于生物基因工程抗體技術，特別是涉及一種雜交瘤細胞株6F9、其產生的抗人CD70單克隆抗體及其應用。

技術背景

CD70是Ⅱ型跨膜糖蛋白，也屬TNF家族。人CD70是一個由193個氨基酸組成的三聚體，其中胞膜外的155個氨基酸序列與TNF配體超家族的其他成員具有一定的同源性。細胞因子受體CD27是腫瘤壞死因子受體(TFNR)超家族的成員，其在細胞生長和分化以及凋亡中起作用。CD27的配體是CD70，屬于配體的腫瘤壞死因子家族。

正常情況下，CD70只瞬時表達在激活的T和B淋巴細胞及成熟的DC細胞表面，在其他非淋巴正常組織或細胞上一般不表達。然而，在許多血液瘤和實體瘤中，CD70組成型表達在腫瘤細胞表面，包括腎細胞癌、轉移性乳腺癌、腦腫瘤、白血病、淋巴瘤和鼻咽癌等。CD27主要表達在成熟T淋巴細胞、記憶B淋巴細胞、生發中心B細胞及NK細胞上，在一些血液腫瘤細胞上也表達CD27。CD70與CD27相互作用后，使得CD27胞內段結合TRAF2/5，從而激活NF-KB和c-Jun激酶信號通路，引起細胞增殖、生存和分化等。另外，CD70與CD27結合后也可能使CD27胞內段結合Siva從而引起Caspase介導的細胞凋亡。

腫瘤細胞表面組成型表達的CD70主要通過四種可能的機制促進腫瘤的免疫逃逸。1.增加免疫抑制性調節T細胞數量；2.誘導T細胞凋亡；3.誘導T細胞耗竭；4.促進共表達CD27的腫瘤細胞增殖、生存。基于上述特性，CD70作為抗腫瘤治療靶點，其主要具有以下三方面優勢：1.較為廣泛的適應癥；2.特異性較強，毒性作用較小，適合CART選擇靶點；3.CD70抗體可以介導內吞從而成為ADC優秀靶點。目前尚未有針對CD70抗體藥上市，基本上都處于不同臨床時期，而且以ADC為主。

發明內容

發明目的：針對上述現有技術，本發明提供了一種雜交瘤細胞株6F9、其產生的抗人CD70單克隆抗體，還提供了所述抗人CD70單克隆抗體的制備方法，以及抗人CD70單克隆抗體的可變區氨基酸序列及核酸序列。本發明還進一步提供了上述單克隆抗體的制藥應用。

技術方案：本發明所述的雜交瘤細胞株6F9，保藏于中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCC NO:C2019259，地址：武漢市武漢大學，保藏時間：2019年10月29日。

本發明所述雜交瘤細胞株6F9產生的抗人CD70單克隆抗體。

所述抗人CD70單克隆抗體，其重鏈可變區的CDRH1為SEQ ID NO：4所示氨基酸序列，CDRH2為SEQ ID NO：6所示氨基酸序列，CDRH3為SEQ ID NO：8所示氨基酸序列；其輕鏈可變區的CDRL1為SEQ ID NO：12所示氨基酸序列，CDRL2為SEQ ID NO：14所示氨基酸序列，CDRL3為SEQ ID NO：16所示氨基酸序列。

進一步的，所述抗人CD70單克隆抗體重鏈可變區為SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，其輕鏈可變區為SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列。

所述抗人CD70單克隆抗體還包括選自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM或IgA亞型的重鏈恒定區，以及選自Kappa或者Lambda亞型的輕鏈恒定區。

優選的，所述抗人CD70單克隆抗體還包括選自IgG1亞型的重鏈恒定區，以及選自Kappa亞型的輕鏈恒定區。

本發明還公開了一種編碼上述抗人CD70單克隆抗體的核酸，其重鏈可變區如SEQID NO：1所示，其輕鏈可變區如SEQ ID NO：9所示。