[發明專利]一種組織培養體系及其在動物腦組織培養中的應用

有效

• 申請號: 201911049124.8
• 申請日: 2019-10-31
• 公開（公告）號: CN110713980B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 王鵬;馬康;陳章平;黃卓群;萬定;牛建國;任雙來;顧金海;張燕;任曉璠;王峰;孫濤
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079
• 代理公司: 北京正華智誠專利代理事務所(普通合伙) 11870
• 代理人: 呂春艷

本發明公開了一種組織培養體系，本發明中的組織培養體系主要用于動物腦組織的培養，包括以下體積百分比的組分：BME基礎培養基23～26％，MEM基礎培養基0.8～1.2％，Neurobasal基礎培養基44～46％，馬血清24～26％，B27無血清添加劑1～1.5％，葡萄糖糖液1.2～1.5％，谷氨酸0.8～1.2％和雙抗0.8～1.2％。采用本發明的培養體系，可使動物腦組織在體外長期培養，可為癲癇、腦神經發育及多種退行性神經疾病研究提供研究模型。

技術領域

本發明屬組織培養于技術領域，具體涉及一種組織培養體系以及該培養體系在動物腦組織培養中的應用。

背景技術

1970年和1972年，Wolf和Hauw等第一次發表小腦組織培養的研究。1971年，Boyd報告了詳細的組織培養技術，并在細胞培養玻片大量培養組織。1973年，Ansevin和Lipps改進此方法，可在組織培養板中培養組織。1981年至2001年和Victorov研究組利用一種稱為roller?tube技術培養腦組織。1991年，Stoppini等利用半透膜培養腦組織。但是現有技術中還沒有關于腦神經發育及多種退行性神經疾病研究模型專用培養基的記載。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種新組織培養體系，為動物腦組織在體外長期培養，腦神經發育及多種退行性神經疾病研究模型提供一套支撐體系。

為了達到上述目的，本發明所采用的技術方案是：提供一種組織培養體系，包括以下體積百分比的組分：

BME基礎培養基23～26％，MEM基礎培養基0.8～1.2％，Neurobasal基礎培養基44～46％，馬血清24～26％，B27無血清添加劑1～1.5％，葡萄糖糖液1.2～1.5％，谷氨酸0.8～1.2％和雙抗0.8～1.2％。

在上述技術方案的基礎上，本發明還可以做如下改進。

進一步，本發明中的組織培養體系，包括以下體積百分比的組分：

BME基礎培養基25％，MEM基礎培養基1％，Neurobasal基礎培養基45％，馬血清25％，B27無血清添加劑1％，葡萄糖糖液1％，谷氨酸1％和雙抗1％。

本發明中的組織培養基主要用于動物腦組織培養，進行動物腦組織培養時，具體操作如下：

S1：用組織切片機將動物腦組織切割成厚度為100～450μm的切片；

S2：將動物腦組織切片放入膜插件后，放入組織培養體系中培養；每兩天更換一次組織培養體系；培養在37℃、5％CO₂條件下進行。

本發明的有益效果是：采用本發明的培養體系，可使動物腦組織在體外長期培養，可以為癲癇、腦神經發育及多種退行性神經疾病研究模型制備提供新的途徑。

附圖說明

圖1為動物腦組織用培養體系一體外培養28天后的神經軸突和髓鞘化免疫熒光圖片；

圖2為動物腦組織用培養體系一體外培養15天后制備的神經軸突脫髓鞘模型免疫熒光的圖片；

圖3為動物腦組織用培養體系一體外培養28天后的小膠質細胞免疫熒光圖片；

圖4為動物腦組織用培養體系一體外培養15天后制備的神經軸突脫髓鞘模型中小膠質細胞免疫熒光的圖片；

圖5為動物腦組織用培養體系四體外培養28天后的神經軸突和髓鞘化免疫熒光圖片；

圖6為動物腦組織用培養體系四體外培養15天后的神經軸突和髓鞘化免疫熒光圖片。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明的具體實施方式做詳細的說明。1.本發明中所用MEM培養基的成分如表1所示：