[發明專利]檢測肺癌的引物組和試劑盒

有效

• 申請號: 201911046807.8
• 申請日: 2019-10-30
• 公開（公告）號: CN110699457B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發明（設計）人: 任建衛;郭瑋;劉俊;楊敏
• 申請（專利權）人: 深圳瑞科生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 方良

本發明屬于基因檢測技術領域，具體涉及一種檢測肺癌的引物組和試劑盒。所述引物組包括：如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的第一外引物對，如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的第一內引物對；如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的第二外引物對，如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的第二內引物對；如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的第三外引物對，如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的第三內引物對；如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的第四外引物對，如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示的第四內引物對。

技術領域

本發明屬于基因檢測技術領域，具體涉及一種檢測肺癌的引物組和試劑盒。

背景技術

肺癌是世界上最常見的惡性腫瘤，2018年全世界新發肺癌210萬例，占所有新發腫瘤病例的11.6％，死亡180萬例，占所有腫瘤死亡病例的18.4％，均排在第一位。肺癌也是我國主要的的惡性腫瘤之一，由于人口基數較大，我國肺癌的新發病例和死亡病例數遠超其他國家，肺癌的疾病負擔一直以來都十分為沉重。

早期肺癌生存率遠遠高于晚期肺癌，研究發現一期肺癌的一年存活率可達85％，是四期肺癌患者的五倍之多，因此降低肺癌患者死亡率的關鍵在于早期診斷和早期治療。目前的肺癌檢測技術中，傳統的侵入性(invasive)方法，例如組織活檢，正逐漸被先進的非侵入性(non-invasive)方法所取代，其中，基于生物標志物分子檢測的液體活檢技術在肺癌早期診斷中擁有廣闊的應用前景。

腫瘤蛋白質生物標志物如癌胚抗原(CEA)、鱗狀細胞癌抗原(SCCA)、神經元特異性烯醇酶(NSE)、細胞角蛋白19片段(Cyfra21-1，KRT19)等已廣泛用于肺癌的篩查診斷、療效評估、術后檢測、預后判斷等方面。這些標志物的實用性在臨床實踐中已經得到了充分的證實，然而由于抗原抗體反應中會出現無法避免的交叉反應現象，因此蛋白分子檢測在特異性、靈敏性方面相較于核酸分子檢測具有很大的局限性。相比于蛋白分子，核酸分子的一大優勢就是可以通過PCR技術進行擴增，并通過測序技術鑒定序列，從而能夠顯著提高靈敏性以及特異性。

目前用于肺癌早期診斷的核酸分子標志物主要為血漿內循環的或外泌體包含的腫瘤DNA(ctDNA)和微小核糖核酸(microRNAs，miRNA)。DNA作為腫瘤標志物，主要通過檢測甲基化、核苷酸突變或基因融合位點進行癌癥診斷。甲基化步驟繁瑣，技術壁壘高，準確性很難得到保證。而基因突變或融合隨機性大，受影響區域的定位比較困難。例如即使在肺癌中兩個高頻基因間融合，KIF5B-RET，其融合位點在基因組中的定位也是不同的。另外，目前所檢測到的DNA腫瘤標志物變化，發生頻率較低，例如在一項研究報告中，ALK融合基因陽性率僅為3.43％，而另一項報告中，EML4-ALK基因融合檢出率為7.3％。由此可見，基于DNA分子的檢測手段的覆蓋率是比較低的。

miRNA作為腫瘤標志物被廣泛應用于液體活檢的開發當中，然而，作為一類長度僅僅約為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，通過序列判斷其精準性、特異性擁有一定難度。Abcam曾經開發了一個基于miRNA檢測的肺癌診斷試劑盒(產品號ab04060)卻停止推銷，大概就是精準性、特異性的原因。另外，目前識別出miRNA數目有限，僅有2300個左右，也大大限制了miRNA在癌癥診斷中的應用潛力。mRNA、LncRNA等長鏈RNA的表達在腫瘤細胞中會發生很大的變化，但目前在液體活檢的應用還很少見到報道，對RNA降解的顧慮是主要原因。然而，研究表明非低溫長期保存的樣本中mRNA片段仍然能夠有效提取及定量。另外，相較于目前識別出的數目有限的miRNA，mRNA和LncRNA的變化能夠更加準確地反應患者的生理狀態，因此，血漿長鏈RNA相關片段在癌癥診斷中的應用日益受到關注。

另外，現有的基于定量分析的肺癌分子診斷方法未能明確區分慢阻肺(COPD)和肺癌的病理變化，例如臨床普遍采用的肺癌標志物分子CA125實際上在COPD條件下也有上調，因此，如何區分COPD和肺癌也是肺癌早期診斷中的一大挑戰。