[發明專利]檢測引發血流感染的球菌的引物和/或探針組合物及其應用

在審

• 申請號: 201911042212.5
• 申請日: 2019-10-30
• 公開（公告）號: CN110669851A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發明（設計）人: 倪劍鋒;高華山;史俊穎;張博學;楊實;劉春燕;童惠姍;孫莎莎
• 申請（專利權）人: 寧波基內生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/14;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/44;C12R1/445;C12R1/01;C12R1/46
• 代理公司: 11466 北京君恒知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 黃啟行

本申請提供了檢測引發血流感染的球菌的引物和/或探針組合物及其應用。本申請具體涉及用于檢測肺炎鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌、化膿性鏈球菌、無乳鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌以及凝固酶陰性葡萄球菌和金黃色葡萄球菌中的一種或多種的引物和/或探針組合物或相關的試劑或試劑盒，由此大大縮短這些球菌的檢測周期，提高了效率和檢測通量，迎合了檢測需求。此外，本申請的方法及其相關產品具有較高的特異性、靈敏度和準確性。

技術領域

本申請屬于分子生物學領域，具體涉及用于檢測引發血流感染的球菌，特別是革蘭氏陽性球菌的引物和/或探針組合物及其應用。

背景技術

血流感染(BSI)是指各種病原菌入血液循環引起的全身炎癥反應、感染及中毒，是一種嚴重危及生命的感染性疾病。由于該病起病隱匿、發展迅速，若未能及時有效治療，會危及患者生命。但是，血流感染的臨床表現缺乏特異性，易漏診、誤診，因此早期診斷血流感染具有重要的臨床意義。

引起血流感染的病原菌主要分為三類:革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和真菌。在常見的血流感染病原菌中，革蘭氏陽性菌主要包括各種球菌，如肺炎鏈球菌、糞腸球菌、屎腸球菌、化膿性鏈球菌、無乳鏈球菌以及凝固酶陰性葡萄球菌和金黃色葡萄球菌等，而腦膜炎奈瑟菌(又稱為腦膜炎球菌)為革蘭氏陰性球菌。

一直以來，血培養是公認的診斷血流感染的“金標準”，通過生化方法或顯微鏡觀察來確定病原菌。然而，該方法所需周期長，對于較難生長的病原菌或者已使用過抗菌藥物治療的患者敏感度較低，因而在血流感染早期診斷中的作用十分有限。缺乏準確診斷結果導致臨床醫師難以選擇最佳的治療方案，而盲目使用抗生素可能會導致患者的生存率降低、細菌耐藥性的出現以及治療費用的增加等不良后果。

因此，亟需能夠對血流感染進行早期診斷的方法及相關產品。

發明內容

為了解決上述問題，第一方面，本申請提供了用于檢測引發血流感染的球菌的引物和/或探針組合物，其包含選自用于檢測以下一種或多種靶標的引物和/或探針：肺炎鏈球菌自溶素基因(lytA基因)，糞腸球菌轉錄調控基因(Ef0027基因)，屎腸球菌d-丙氨酸聚連接酶基因(ddl基因)，化膿性鏈球菌致熱外毒素B基因(speB基因)，無乳鏈球菌表面免疫相關蛋白基因(Sip基因)，腦膜炎奈瑟菌莢膜轉移基因A(ctrA基因)，凝固酶陰性葡萄球菌超氧化物歧化酶基因(sodA基因)，以及金黃色葡萄球菌甲氧西林耐藥輔助基因(femA基因)。

在具體實施方案中，本申請提供的用于檢測引發血流感染的球菌的引物和/或探針組合物包含分別用于檢測所述lytA基因、所述Ef0027基因、所述ddl基因、所述speB基因、所述Sip基因、所述ctrA基因、所述sodA基因和所述femA基因的引物和/或探針中的任意兩種、三種、四種、五種、六種、七種或八種。

例如，在一實施方案中，本申請提供的用于檢測引發血流感染的球菌的引物和/或探針組合物包含分別用于檢測所述lytA基因和/或所述Ef0027基因的引物和/或探針。

在一實施方案中，本申請提供的用于檢測引發血流感染的球菌的引物和/或探針組合物包含分別用于檢測所述ddl基因和/或所述speB基因的引物和/或探針。

在一實施方案中，本申請提供的用于檢測引發血流感染的球菌的引物和/或探針組合物包含分別用于檢測所述Sip基因和/或所述ctrA基因的引物和/或探針。

在一實施方案中，本申請提供的用于檢測引發血流感染的球菌的引物和/或探針組合物包含分別用于檢測所述sodA基因和/或所述femA基因的引物和/或探針。

在另一實施方案中，本申請提供的用于檢測引發血流感染的球菌的引物和/或探針組合物中，用于檢測所述lytA基因的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，探針序列如SEQ ID NO.3所示。