[發明專利]間斷缺氧處理干細胞來源外泌體及在心肌組織中的應用

有效

• 申請號: 201911041488.1
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110577931B
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 王長謙;毛承譽
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61P9/10
• 代理公司: 上海市海華永泰律師事務所 31302
• 代理人: 包文超

1.一種脂肪間充質干細胞來源的外泌體，其特征在于對脂肪間充質干細胞進行間斷缺氧刺激制得，所述外泌體含有microRNA 224-5p、microRNA 141-3p、microRNA 34a-5p、microRNA 23a-3p、microRNA 130a-3p、microRNA 23b-3p、microRNA 200a-3p、microRNA93-5p、microRNA 301a-3p和microRNA 152-3p。

2.根據權利要求書1所述的脂肪間充質干細胞來源的外泌體，其特征在于具有組織器官缺血-再灌注損傷保護作用。

3.根據權利要求書1所述的脂肪間充質干細胞來源的外泌體在制備對組織器官缺血-再灌注損傷修復的藥物或器械中的應用。

4.一種對組織器官缺血-再灌注損傷修復的組合物，其特征在于以權利要求書1所述的脂肪間充質干細胞來源的外泌體為活性成分。

5.一種對組織器官缺血-再灌注損傷修復的醫療器械，其特征在于以權利要求書1所述的脂肪間充質干細胞來源的外泌體為活性成分。

6.一種制取權利要求1所述的脂肪間充質干細胞來源外泌體的方法，其特征在于包括如下步驟：

當P2～P3代的脂肪間充質干細胞匯合率達85％～90％時，通過缺氧小室對容器中的細胞進行間斷的缺氧刺激，即通過缺氧→復氧→缺氧→復氧→缺氧→復氧共3個循環后，將細胞培養基更換為含有5％v/v去除外泌體的胎牛血清的DMEM-F12完全培養基后于培養箱中孵育24小時后收集培養基，獲取細胞培養上清液，并進行膜過濾后，收集濾液；再將濾液置于300g～100000g轉速下差速離心后獲得沉淀，即為所述的外泌體。

7.根據權利要求書6所述的方法，其特征在于所述的缺氧，即將脂肪間充質干細胞置于缺氧小室中，把細胞培養基更換為無糖無血清的DMEM培養基后，對小室內通入80％v/v～95％v/v氮氣和0％v/v～5％v/v二氧化碳的混合氣體并通過氧電池檢測缺氧小室內氣體氧濃度直至氧氣濃度為0％v/v后關閉小室通氣閥門隔絕細胞糖分及氧氣供應45分鐘～60分鐘。

8.根據權利要求書6所述的方法，其特征在于所述的復氧，即打開缺氧小室閥門，并將培養基更換為具有糖分的DMEM-F12培養基后移入5％v/v二氧化碳、37℃培養箱中孵育1小時。

9.根據權利要求書6所述的方法，其特征在于所述的差速離心方法如下：先在4℃300g轉速離心10分鐘，取上清液；然后于4℃2,000g轉速離心10分鐘，取上清液；再于4℃10,000g轉速離心60分鐘，取上清液；接著于4℃100,000g轉速離心70分鐘，棄去上清，PBS重懸沉淀；最后于4℃100,000g轉速離心70分鐘后沉淀即為外泌體。