[發(fā)明專利]用于檢測生物組分的方法和系統(tǒng)在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201911041486.2 | 申請(qǐng)日： | 2013-08-12 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110643681A | 公開（公告）日： | 2020-01-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | A·R·阿貝特;D·J·伊斯特本;A·R·夏穆比 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 加利福尼亞大學(xué)董事會(huì) |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6806 | 分類號(hào)： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 31100 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 | 代理人： | 陳揚(yáng)揚(yáng) |
| 地址： | 美國加利*** | 國省代碼： | 美國;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 生物樣本 循環(huán)腫瘤細(xì)胞 腫瘤細(xì)胞 檢測 可用 | ||
1.一種擴(kuò)增一種或多種目標(biāo)多核苷酸的方法，所述方法包括：
(a)在液滴中從樣品中裂解一種或多種含有多核苷酸的組分以在裂解液滴中形成裂解物并在蛋白酶存在下孵育所述裂解物以促進(jìn)蛋白酶活性，所述裂解物包含所述一種或多種目標(biāo)多核苷酸且所述裂解液滴是不混溶的載體流體；
(b)滅活所述蛋白酶；
(c)向所述液滴中直接皮可注射試劑，所述試劑用于進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)以在擴(kuò)增液滴中形成擴(kuò)增混合物，所述擴(kuò)增液滴是在所述不混溶的載體流體中；以及
(d)在所述擴(kuò)增液滴中擴(kuò)增所述一種或多種目標(biāo)多核苷酸；
其中，在步驟(d)之前不從所述裂解液滴或從所述擴(kuò)增液滴中選擇性除去試劑。
2.一種擴(kuò)增一種或多種目標(biāo)多核苷酸的方法，所述方法包括：
(a)在液滴中使用蛋白酶從樣品中裂解一種或多種含有多核苷酸的組分以在裂解液滴中形成裂解物，所述裂解物包含所述一種或多種目標(biāo)多核苷酸且所述裂解液滴是不混溶的載體流體；
(b)滅活所述蛋白酶；
(c)向所述液滴中皮可注射試劑用于進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)以在擴(kuò)增液滴中形成擴(kuò)增混合物，所述擴(kuò)增液滴是在所述不混溶的載體流體中；以及
(d)在所述擴(kuò)增液滴中擴(kuò)增所述一種或多種目標(biāo)多核苷酸；其中，步驟(a)的所述蛋白酶在步驟(c)之前是滅活的。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，所述擴(kuò)增液滴的體積是0.001至1000皮升。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，所述擴(kuò)增液滴的直徑是0.1微米至1000微米。
5.如權(quán)利要求1或2所述的方法，所述含有多核苷酸的組分是細(xì)胞、病毒或孢子。
6.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，步驟(c)包括(i)將所述裂解液滴與包含所述用于進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)的試劑的流體流融合，以及(ii)從所述流體流形成所述擴(kuò)增液滴。
7.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，通過液滴聚結(jié)將所述用于進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)的試劑添加至所述裂解液滴。
8.如權(quán)利要求5所述的方法，所述裂解液滴含有單細(xì)胞裂解物。
9.如權(quán)利要求1或2所述的方法，所述一種或多種目標(biāo)多核苷酸是DNA。
10.如權(quán)利要求1或2所述的方法，所述一種或多種目標(biāo)多核苷酸是RNA。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中，擴(kuò)增包括逆轉(zhuǎn)錄以生成逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。
12.如權(quán)利要求1或2所述的方法，所述用于進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)的試劑包括用于擴(kuò)增多個(gè)不同目標(biāo)多核苷酸的試劑。
13.如權(quán)利要求1或2所述的方法，所述一種或多種目標(biāo)多核苷酸對(duì)應(yīng)于癌基因。
14.如權(quán)利要求1或2所述的方法，所述方法還包括檢測是否存在步驟(d)中擴(kuò)增的擴(kuò)增產(chǎn)物的步驟。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中，檢測是否存在擴(kuò)增產(chǎn)物包括在所述擴(kuò)增液滴中對(duì)檢測組分進(jìn)行檢測。
16.如權(quán)利要求14所述的方法，其中，檢測是否存在擴(kuò)增產(chǎn)物包括對(duì)所述擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序。
17.如權(quán)利要求14所述的方法，其中，檢測是否存在擴(kuò)增產(chǎn)物包括形成雙重乳液，所述雙重乳液包含外部液滴內(nèi)的擴(kuò)增液滴，并基于液滴尺寸和熒光分選所述雙重乳液。
18.如權(quán)利要求14所述的方法，所述方法還包括基于檢測步驟的結(jié)果分選所述擴(kuò)增液滴的步驟。
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