[發(fā)明專利]一種組合蛋白及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911038409.1
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110655564B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊光友;華瑞其;宋宏宇
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N9/90;C07K19/00;A61K39/00;A61P33/10
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 劉猛

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種組合蛋白及其應(yīng)用。本發(fā)明所述組合蛋白為包括細(xì)粒棘球絳蟲膜聯(lián)蛋白EgANX和磷酸丙糖異構(gòu)酶EgTIM的組合蛋白；或為細(xì)粒棘球絳蟲膜聯(lián)蛋白EgANX和磷酸丙糖異構(gòu)酶EgTIM的融合蛋白。本發(fā)明以細(xì)粒棘球絳蟲膜聯(lián)蛋白EgANX和磷酸丙糖異構(gòu)酶EgTIM作為抗細(xì)粒棘球絳蟲蛋白進(jìn)行免疫實驗，結(jié)果顯示兩個蛋白對犬表現(xiàn)出較好的免疫保護(hù)作用，并能夠產(chǎn)生穩(wěn)定的抗體，具備開發(fā)犬用細(xì)粒棘球絳蟲疫苗的潛力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種組合蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

囊性包蟲病又稱為囊型棘球蚴病，是由細(xì)粒棘球絳蟲中絳期幼蟲引起的一種全球范圍性的人獸共患寄生蟲病。該病每年造成約30億的經(jīng)濟損失，在我國20多個省份有該病發(fā)生，主要集中在青海、西藏、新疆等地，據(jù)估計我國約有35萬-130萬包蟲病患者。包蟲病為我國二類動物疫病，是我國優(yōu)先防治和重點防范的16種動物疫病之一。

細(xì)粒棘球絳蟲需要中間宿主(羊牛等家畜)和終末宿主(犬)才能完成其生活史，阻斷傳播途徑的任意一環(huán)，均能有效阻斷包蟲病的傳播和感染。犬是細(xì)粒棘球絳蟲的終末宿主和細(xì)粒棘球蚴病的傳染源，目前采用的防控措施是“犬犬驅(qū)蟲，月月驅(qū)蟲”。由于長期使用化學(xué)藥物，出現(xiàn)了耐藥性、藥物殘留、環(huán)境污染等一系列問題。而疫苗具有安全、無殘留、動物無休藥期的優(yōu)點，免疫終末宿主是防控該病的重要措施之一。在我國牧區(qū)，犬的總數(shù)量遠(yuǎn)小于家畜數(shù)量，因此對犬進(jìn)行疫苗預(yù)防更經(jīng)濟且更利于實施。

目前尚無尚業(yè)化的用于免疫犬(終末宿主)的疫苗來預(yù)防犬感染細(xì)粒棘球絳蟲。因此篩選高效的疫苗抗原是今后重點研究方向之一。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種組合蛋白，使其對犬表現(xiàn)出較好的免疫保護(hù)作用，并能夠產(chǎn)生穩(wěn)定的抗體，可作為一種針對細(xì)粒棘球絳蟲的候選疫苗；

本發(fā)明的另外一個目的在于提供上述組合蛋白或其編碼序列在制備預(yù)防細(xì)粒棘球絳蟲的疫苗中的應(yīng)用；

本發(fā)明的另外一個目的在于提供利用上述組合蛋白制備的預(yù)防細(xì)粒棘球絳蟲的疫苗。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種組合蛋白，其為包括細(xì)粒棘球絳蟲膜聯(lián)蛋白EgANX和EgTIM的組合蛋白；或為細(xì)粒棘球絳蟲膜聯(lián)蛋白EgANX和EgTIM的融合蛋白。其中，細(xì)粒棘球絳蟲膜聯(lián)蛋白EgANX的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述細(xì)粒棘球絳蟲磷酸丙糖異構(gòu)酶EgTIM的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本發(fā)明通過原核表達(dá)出細(xì)粒棘球絳蟲的膜聯(lián)蛋白EgANXA基因(SEQ ID NO:3所示)和磷酸丙糖異構(gòu)酶Eg-TIM基因(SEQ ID NO:4所示)，用獲得的重組蛋白對比格犬進(jìn)行混合免疫，獲得了較高的免疫保護(hù)效果。

以所述組合蛋白輔以免疫佐劑免疫比格犬，每只犬肌肉注射200μg蛋白免疫復(fù)合物，一共免疫2次，每次間隔兩周，二免后兩周攻蟲，免疫前后以及感染后定期對所有比格犬進(jìn)行前臂頭靜脈采血，二免4周后剖檢犬進(jìn)行蟲體計數(shù)和蟲體長寬度測量。在犬的細(xì)粒棘球絳蟲免疫保護(hù)組中，空白對照組平均荷蟲數(shù)為17420，蟲體平均長度為2.19mm，平均寬度為0.33mm；rEgANX-rEgTIM聯(lián)合免疫組平均荷蟲數(shù)為5120，蟲體的平均長度為1.66mm，平均寬度為0.24mm，減蟲率為：70.61％；rEgANX組免疫組平均荷蟲數(shù)為7425，蟲體的平均長度為1.49mm，平均寬度為0.25mm，減蟲率為：57.38％。rEgTIM組免疫組平均荷蟲數(shù)為8155，蟲體的平均長度為1.58mm，平均寬度為0.25mm，減蟲率為：53.18％。免疫組的蟲體長寬度均小于對照組。與對照組相比，免疫組均顯著地提高了試驗比格犬對細(xì)粒棘球絳蟲的抵抗能力，且rEgANX和rEgTIM混合免疫組效果最好(P0.05)。

基于此，本發(fā)明提供了所述組合蛋白或其編碼序列在制備預(yù)防細(xì)粒棘球絳蟲的疫苗中的應(yīng)用。