[發明專利]人循環腫瘤細胞MSI檢測引物組、試劑盒及檢測方法在審
| 申請號： | 201911038007.1 | 申請日： | 2019-10-29 |
| 公開（公告）號： | CN110699455A | 公開（公告）日： | 2020-01-17 |
| 發明（設計）人： | 張惠丹;戴敬;楊麗萍;趙洪玉 | 申請（專利權）人： | 蘇州繪真醫學檢驗有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6886 | 分類號： | C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 32266 蘇州中合知識產權代理事務所(普通合伙) | 代理人： | 劉召民 |
| 地址： | 215000 江蘇省蘇州市工業園*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 循環腫瘤細胞 檢測 靈敏度 試劑盒 檢測引物 特異性強 準確檢測 引物組 狀態時 檢出 無創 優化 | ||
1.人循環腫瘤細胞MSI檢測引物組，包括針對5個MSI檢測代表位點BAT-25、BAT-26、D2S123、D5S346、D17S250檢測的5對熒光標記引物，所述引物及其熒光標記如下：
2.根據權利要求1所述的人循環腫瘤細胞MSI檢測引物組，其特征在于，還包括2個內標位點Penta C、Penta E的2對熒光標記引物，引物及其熒光標記如下：
3.人循環腫瘤細胞MSI檢測試劑盒，包括權利要求1或2所述的人循環腫瘤細胞MSI檢測引物組。
4.根據權利要求3所述的人循環腫瘤細胞MSI檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還包括MultiPlex緩沖液，MultiPlex DNA聚合酶。
5.根據權利要求4所述的人循環腫瘤細胞MSI檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還包括內參標志物和陰性對照樣品。
6.人循環腫瘤細胞MSI檢測方法，包括如下步驟：
1)將擴增混合物分裝到PCR反應管底部并分別加入CTCs樣本、陰性對照樣品及陰性對照，所述擴增混合物包括MultiPlex緩沖液、MSI引物混合液、MultiPlex DNA聚合酶和NFH2O，所述CTCs樣本中CTCs的個數不少于20個/μl；
2)將PCR反應管轉移到PCR儀上進行PCR擴增，擴增條件如下：
3)制備待分析樣品，對PCR擴增產物進行毛細管電泳檢測；
4)對步驟3)輸出的數據進行分析，以確定檢測樣品的MSI狀態。
7.根據權利要求6所述的人循環腫瘤細胞MSI檢測方法，其特征在于，步驟1)中通過以下方法獲得CTCs樣本：取腫瘤患者全血離心分離血漿、白細胞，將白細胞用PBS重懸，采用系統富集CTCs，且用1μl的PBS重懸不少于20個的CTCs。
8.根據權利要求6所述的人循環腫瘤細胞MSI檢測方法，其特征在于，步驟3)中采用內參標志物DD LIZE 500指示35-500bp以內的片段長度。
9.根據權利要求6所述的人循環腫瘤細胞MSI檢測方法，其特征在于，步驟3)中使用Applied3500Dx基因分析儀進行毛細管電泳檢測。
10.根據權利要求9所述的人循環腫瘤細胞MSI檢測方法，其特征在于，步驟4)中使用5軟件對步驟3)輸出的數據進行分析。
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