[發明專利]一種蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN2的制備方法

在審

• 申請號: 201911036671.2
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN111000877A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 時連根;解鴻青
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K36/068
• 分類號: A61K36/068;A61K35/64;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林超

1.一種蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN2的制備方法，其特征在于：

1)將蟬花處理獲得蟬花粉；

2)取蟬花粉加入乙醇溶液并進行超聲處理；

3)超聲處理后的溶液依次進行水浴回流和抽濾處理，然后離心處理收集上清液；

4)上清液濃縮后冷凍干燥，得到粗核苷類化合物；

5)用雙蒸餾水將粗核苷類化合物溶解，離心取上清液后，過濾膜再上NKA-Ⅱ型大孔吸附樹脂柱吸附處理；

6)用乙醇溶液洗脫后收集洗脫峰的洗脫液，濃縮并冷凍干燥后得到核苷類化合物干燥物；

7)用雙蒸餾水將核苷類化合物干燥物溶解，離心取上清液后，過濾膜再上SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換柱，用NaCl水溶液進行梯度洗脫，收集0.3mol/L NaCl洗脫峰的洗脫液；

8)洗脫液濃縮并冷凍干燥，用雙蒸餾水溶解，過濾膜再上NKA-Ⅱ型大孔吸附樹脂柱脫鹽；

9)用乙醇溶液洗脫后收集洗脫峰的洗脫液，冷凍干燥后得到均一的核苷類化合物，取名CCN2。

2.根據權利要求1所述的一種蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN2的制備方法，其特征在于方法的工藝條件具體為：

1)蟬花于-50℃下真空干燥36h，于-15℃下超微粉碎5min，過80～100目篩，得到蟬花粉；

2)取蟬花粉，加入乙醇溶液，混勻后，在30℃下用超聲波清洗儀以500W功率53KHz頻率的超聲波磁場作用30min；

3)于100℃水浴中回流提取3次，共2.0h，集中收集三次的提取液，三次提取液經過合并后用抽濾機進行抽濾處理，棄掉濾渣，將濾液用高速離心機于10000rpm下離心5min，棄掉沉淀，收集上清液；

4)上清液用旋轉蒸發儀濃縮后，-50℃下真空干燥，得到粗核苷類化合物；

5)用雙蒸餾水溶解粗核苷類化合物并調整質量濃度為5.0～6.0mg/mL，將溶液在8000rpm下離心10min，取上清液，過0.45μm濾膜，上NKA-Ⅱ型大孔吸附樹脂柱吸附，用5倍柱體積的去離子水充分沖洗；

6)用質量分數為75％的乙醇溶液于2.0～3.0mL/min流速下洗脫，自動收集器收集，用紫外分光光度計于254nm波長測定，收集合并具有核苷類化合物洗脫峰的洗脫液，用旋轉蒸發儀濃縮后，-50℃下真空干燥，得到核苷類化合物干燥物；

7)用雙蒸餾水溶解核苷類化合物干燥物并調整質量濃度為2.0～2.5mg/mL，將溶液在8000rpm下離心10min，取上清液，過0.45μm濾膜，上SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換柱，用0-0.5mol/L濃度梯度的NaCl水溶液進行梯度洗脫，洗脫流速為1.0-1.3mL/min，收集0.3mol/L濃度的NaCl水溶液對應洗脫峰的洗脫液；

8)洗脫液用旋轉蒸發儀濃縮后，-50℃下真空干燥，用雙蒸餾水溶解干燥物并調整質量濃度為2.5～3.0mg/mL，將溶液在8000rpm下離心10min，取上清液，過0.45μm濾膜，上NKA-Ⅱ型大孔吸附樹脂柱吸附，用5倍柱體積的去離子水充分沖洗；

9)用質量分數為75％的乙醇溶液于2.0～3.0mL/min流速下洗脫，自動收集器收集，用紫外分光光度計于254nm波長測定，收集合并具有核苷類化合物洗脫峰的洗脫液，用旋轉蒸發儀濃縮后，-50℃下真空干燥，得到均一的核苷類化合物，取名CCN2。

3.根據權利要求1所述的一種蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN2的制備方法，其特征在于：所述步驟2)中，按W：V為1:20配比加入蟬花粉和質量分數為85％的乙醇溶液。

4.一種權利要求1所述方法制備成的蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN2的應用，其特征在于：所述蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN2用于制備抗癌藥物。

5.根據權利要求4所述的蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN2的應用，其特征在于：所述抗癌藥物為抗擊人胃癌細胞SGC-7901和人胃腺癌細胞AGS的藥物。