[發(fā)明專(zhuān)利]一種“金蠶花”抗癌活性核苷類(lèi)化合物JCHN1的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911036654.9
• 申請(qǐng)日: 2019-10-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110946884A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 時(shí)連根;李聰慧
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K36/068
• 分類(lèi)號(hào): A61K36/068;A61K35/64;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 林超

1.一種“金蠶花”抗癌活性核苷類(lèi)化合物JCHN1的制備方法，其特征在于：

1)將蟬擬青霉ST168感染家蠶蛹，培育出“金蠶花”；

2)將“金蠶花”處理獲得“金蠶花”粉；

3)取“金蠶花”粉加入乙醇溶液并進(jìn)行超聲處理；

4)超聲處理后的溶液依次進(jìn)行水浴回流和抽濾處理，然后離心處理收集上清液；

5)上清液濃縮后冷凍干燥，得到粗核苷類(lèi)化合物；

6)用雙蒸餾水將粗核苷類(lèi)化合物溶解，離心取上清液后，過(guò)濾膜再上NKA-Ⅱ型大孔吸附樹(shù)脂柱吸附處理；

7)用乙醇溶液洗脫后收集洗脫峰的洗脫液，濃縮并冷凍干燥后得到核苷類(lèi)化合物干燥物；

8)用雙蒸餾水將核苷類(lèi)化合物干燥物溶解，離心取上清液后，過(guò)濾膜再上SP-Sepharose Fast Flow陽(yáng)離子交換柱，用NaCl水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集水相洗脫峰的洗脫液，冷凍干燥后得到均一的核苷類(lèi)化合物，取名JCHN1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種“金蠶花”抗癌活性核苷類(lèi)化合物JCHN1的制備方法，其特征在于方法的工藝條件具體為：

1)從天目山采集的野生蟬花體中分離出蟬擬青霉ST168，在馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基上于26℃下培養(yǎng)7天，用0.05％吐溫80水溶液洗下分生孢子并配成2-3×10⁸個(gè)/mL分生孢子懸液；將分生孢子懸液均勻噴濕化蛹第2天蠶蛹體表，然后至28℃下培養(yǎng)，待蛹體僵硬后，埋入3-4cm深土中，繼續(xù)28℃下培養(yǎng)，待子座長(zhǎng)出土面后收獲，得到“金蠶花”；

2)“金蠶花”于-50℃下真空干燥36h，于-15℃下超微粉碎5min，過(guò)80～100目篩，得到“金蠶花”粉；

3)取“金蠶花”粉，加入乙醇溶液，混勻后，在30℃下用超聲波清洗儀以500W功率53KHz頻率的超聲波磁場(chǎng)作用30min；

4)于100℃水浴中回流提取3次，共2.1h，集中收集三次的提取液，三次提取液經(jīng)過(guò)合并后用抽濾機(jī)進(jìn)行抽濾處理，棄掉濾渣，將濾液用高速離心機(jī)于10000rpm下離心5min，棄掉沉淀，收集上清液；

5)上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，-50℃下真空干燥，得到粗核苷類(lèi)化合物；

6)用雙蒸餾水溶解粗核苷類(lèi)化合物并調(diào)整質(zhì)量濃度為5.0～6.0mg/mL，將溶液在8000rpm下離心10min，取上清液，過(guò)0.45mm濾膜，上NKA-Ⅱ型大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用5倍柱體積的去離子水充分沖洗；

7)用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％的乙醇溶液于2.0～3.0mL/min流速下洗脫，自動(dòng)收集器收集，用紫外分光光度計(jì)于254nm波長(zhǎng)測(cè)定，收集合并具有核苷類(lèi)化合物洗脫峰的洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，-50℃下真空干燥，得到核苷類(lèi)化合物干燥物；

8)用雙蒸餾水溶解核苷類(lèi)化合物干燥物并調(diào)整質(zhì)量濃度為2.0～2.5mg/mL，將溶液在8000rpm下離心10min，取上清液，過(guò)0.45mm濾膜，上SP-Sepharose Fast Flow陽(yáng)離子交換柱，用0-0.5mol/L濃度梯度的NaCl水溶液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫流速為1.0-1.3mL/min，收集水相洗脫峰的洗脫液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后，-50℃下真空干燥，得到均一的核苷類(lèi)化合物，取名JCHN1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種“金蠶花”抗癌活性核苷類(lèi)化合物JCHN1的制備方法，其特征在于：所述步驟3)中，按W：V為1:40配比加入“金蠶花”粉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液。

4.一種權(quán)利要求1所述方法制備成的“金蠶花”抗癌活性核苷類(lèi)化合物JCHN1的應(yīng)用，其特征在于：所述“金蠶花”抗癌活性核苷類(lèi)化合物JCHN1用于制備抗癌藥物。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的“金蠶花”抗癌活性核苷類(lèi)化合物JCHN1的應(yīng)用，其特征在于：所述抗癌藥物為抗擊人胃癌細(xì)胞SGC-7901的藥物。