[發明專利]一種蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN1的制備方法

在審

• 申請號: 201911036644.5
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110946883A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發明（設計）人: 時連根;解鴻青
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K36/068
• 分類號: A61K36/068;A61K35/64;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林超

本發明公開了一種蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN1的制備方法。將蟬花處理獲得蟬花粉，加入乙醇溶液超聲處理，再依次進行水浴回流和抽濾處理，離心收集上清液，濃縮后冷凍干燥；用雙蒸餾水溶解，離心取上清液，過濾膜后上大孔吸附樹脂柱吸附處理，用乙醇溶液洗脫后收集洗脫峰的洗脫液，濃縮后冷凍干燥；用雙蒸餾水溶解，離心取上清液，過濾膜后上陽離子交換柱，用NaCl水溶液梯度洗脫，收集水相洗脫峰的洗脫液，濃縮并冷凍干燥后得到均一的核苷類化合物CCN1。本發明制備產物純度均一，對人胃癌細胞的生長有抑制作用，對正常細胞的人胚胎腎細胞生長無不良影響，可用于抗癌產品開發。

技術領域

本發明涉及了一種抗癌活性新化合物及制備方法，尤其是涉及了一種蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN1的制備方法。

背景技術

核苷類化合物是生物細胞維持生命活動的基本物質，包括核苷、堿基及核苷類似物，具有抗病毒、抗氧化、抗菌、抗疲勞、提高人體免疫力、抗癌等生理活性，現已被廣泛應用于抗癌、抗病毒、疾病診斷等方面。目前用于臨床和正在研究的核苷類抗癌藥物有數十種，它們主要是通過干擾癌細胞的DNA合成或者核酸轉錄的過程，來抑制蛋白質的合成，從而達到治療癌癥的效果。當前核苷類抗癌藥物主要來源于化學合成和從天然中藥材中提取分離這二個方面，化學合成存在步驟復雜、異構體不好分離、轉化率低、成本高、污染環境等問題，而作為天然中藥材基礎類物質之一的核苷類化合物可以直接或間接作為藥物使用并在抗癌方面展示出了不可取代的獨特作用，深受國內外研究者的高度關注。

蟬花(Cordyceps cicadae)為麥角菌科真菌大蟬草的無性型蟬擬青霉寄生蟬類若蟲體后所產生的子座與若蟲尸體的菌蟲復合體，又名蟬草、蟬茸、胡蟬、金蟬花等，是我國一味傳統的名貴中藥材。有關蟬花的記載最早出現在公元前五世紀的南北朝時期《雷公炮炙論》中“凡使，要白花全者，收得后于屋下東角懸干，去甲土后，用漿水煮一日，至夜，焙干，碾細用之”，后在隋、唐代甄權的《藥性論》、宋代蘇頌的《圖經本草》、明代李時珍的《本草綱目》等中藥古籍均對蟬花的藥用作了詳細記載。蟬花具有疏風散熱、定驚鎮靜等功效，在古方中主要用來治療小兒夜啼、驚厥、風痰潮熱等癥狀，在現方劑中多用來治療慢性腎病、咳嗽以及抗癌、滋補強身等。由于蟬花與冬蟲夏草同屬菌蟲復合體并且具有相近的藥用價值，所以醫學上常將蟬花作為冬蟲夏草的代用品使用。核苷類化合物是蟬花的重要活性成分之一，但有關蟬花核苷類化合物的抗癌作用還不清楚，這阻害了蟬花藥用水平提高及藥用范圍擴大。分離純化制備蟬花抗癌活性核苷類化合物，對于推進蟬花藥用開發具有積極的現實意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN1的制備方法，是采用回流提取、NKA-Ⅱ型大孔吸附樹脂柱分離、SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換柱純化的方法，制備蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN1。

為了達到上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一、一種蟬花抗癌活性核苷類化合物CCN1的制備方法，其特征在于：

1)將蟬花處理獲得蟬花粉；

2)取蟬花粉加入乙醇溶液并進行超聲處理；

3)超聲處理后的溶液依次進行水浴回流和抽濾處理，然后離心處理收集上清液；

4)上清液濃縮后冷凍干燥，得到粗核苷類化合物；

5)用雙蒸餾水將粗核苷類化合物溶解，離心取上清液后，過濾膜再上NKA-Ⅱ型大孔吸附樹脂柱吸附處理；

6)用乙醇溶液洗脫后收集洗脫峰的洗脫液，濃縮并冷凍干燥后得到核苷類化合物干燥物；

7)用雙蒸餾水將核苷類化合物干燥物溶解，離心取上清液后，過濾膜再上SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換柱，用NaCl水溶液進行梯度洗脫，收集水相洗脫峰的洗脫液，冷凍干燥后得到均一的核苷類化合物，取名CCN1。