[發明專利]一種來源于深海真菌新型轉錄調控因子DcGliZ及其應用

有效

• 申請號: 201911035639.2
• 申請日: 2019-10-29
• 公開（公告）號: CN110950940B
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 葉偉;黃自磊;章衛民;朱牧孜;李賽妮;孔亞麗;劉珊;岑由飛
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所(廣東省微生物分析檢測中心)
• 主分類號: C07K14/37
• 分類號: C07K14/37;C12N15/63
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

本發明公開了一種來源于深海真菌新型轉錄調控因子DcGliZ及其應用。其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明首次公開了一種新型深海真菌埃德菌轉錄調控因子DcGliZ，并對其體外功能進行了驗證，經EMSA分析，DcGliZ與膠霉毒素生物合成基因的啟動子pG、pM和pN存在凝膠阻滯條帶。證實了DcGliZ在體外與膠霉毒素生物合成基因啟動子pN、pM和pG的相互作用，從而為后期通過轉錄調控等代謝工程手段提高膠霉毒素產量并獲得新型膠霉毒素類化合物奠定分子生物學基礎。

技術領域

本發明涉及生物化學和分子生物學領域，具體涉及一種新型深海真菌埃德菌轉錄調控因子DcGliZ及其應用。

背景技術

深海真菌由于其處于高壓、高鹽、缺氧、低溫、寡營養等獨特的環境而具有獨特的代謝途徑，因此成為獲取新型具有生物學活性新型天然產物的重要來源。

發明內容

本發明的第一個目的是提供一種來自深海真菌埃德菌的新型轉錄調控因子DcGliZ。

本課題組從深海真菌Dichotomomyces cejpii FS110中獲得了8種結構新穎的新型膠霉毒素，其中部分具有顯著的抗腫瘤活性。在此基礎上，本課題組對D.cejpii FS110進行了全基因組測序，預測了膠霉毒素的生物合成基因簇，其與已知膠霉毒素基因簇的同源性低于20％。

本發明的第一個目的是提供一種轉錄調控因子DcGliZ，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

經本發明人研究發現，轉錄調控因子DcGliZ是一種正向調控真菌膠霉毒素生物合成的轉錄調控因子，轉錄調控因子DcGliZ的缺失會阻斷膠霉毒素的生物合成，因此轉錄調控因子D cGliZ對于膠霉毒素的生物合成至關重要。本項目組從D.cejpii FS110從中發現了新型轉錄調控因子DcGliZ，與已知的GliZ轉錄調控因子同源性最高僅為43％，D.cejpii中gliZ基因在基因簇中的位置與其他真菌中GliZ在基因簇中的位置有顯著差異，預示著D.cejpii獨特的膠霉毒素生物合成轉錄調控機制。為了后期通過對D.cejpii FS110的膠霉毒素進行轉錄調控以獲得更多活性更顯著的新型膠霉毒素及其衍生物，需要對其生物合成轉錄調控功能進行解析。

因此，本發明的第二個目的是提供轉錄調控因子DcGliZ序列在調控膠霉毒素的生物合成基因簇合成膠霉毒素中的應用。

本發明的第三個目的是提供轉錄調控因子DcGliZ在調控gliG的啟動子pG、gliM2的啟動子pM或gliN的啟動子pN中的應用。

本課題組前期從深海真菌D.cejpii FS110中獲得了8種結構新穎的新型膠霉毒素。但D.cejpii中膠霉毒素類化合物的生物合成及轉錄調控機制尚未闡明，因此需要對D.cejpii FS110中膠霉毒素轉錄調控因子進行解析。本發明首次公開了一種新型深海真菌埃德菌轉錄調控因子DcGliZ，并對其體外功能進行了驗證，經EMSA分析，DcGliZ與膠霉毒素生物合成基因的啟動子pG、pM和pN存在凝膠阻滯條帶。證實了DcGliZ在體外與膠霉毒素生物合成基因啟動子pN、pM和pG的相互作用，從而為后期通過轉錄調控等代謝工程手段提高膠霉毒素產量并獲得新型膠霉毒素類化合物奠定分子生物學基礎。

附圖說明

圖1為新型轉錄調控因子DcGliZ的克隆及重組表達載體的構建。lane 1,2kbMarker；Lane2,gliZ基因PCR產物；

圖2為DcGliZ轉錄調控蛋白的表達純化及Western blot驗證；Lane 1,70kDamarker；l ane 2,復性純化后的DcGliZ蛋白；lane 3,Western blot驗證DcGliZ蛋白；Lane4,60kDa marker；