[發(fā)明專利]一種測(cè)定葉黃素成分的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911032340.1
• 申請(qǐng)日: 2019-10-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110879257A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖偉;于桂芳;胡寶玲;胡軍華;閆顯光;王婧;胡晗緋;韋迎春;王振中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京律和信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11446
• 代理人: 蘇捷;姚志遠(yuǎn)

本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定葉黃素成分的方法，其特征在于，該方法采用高效液相色譜檢測(cè)，其中，色譜條件包括：以YMC Carotenoid C30為色譜柱；以甲醇/水為流動(dòng)相A，甲基叔丁基醚為流動(dòng)相B；洗脫程序?yàn)?min～30min、0％～50％B，30min～40min、50％B；所述甲醇/水的比例為88～100:12～0。本發(fā)明包括以高活性成分全反式葉黃素為檢測(cè)指標(biāo)，可以更真實(shí)有效地評(píng)價(jià)葉黃素類產(chǎn)品的質(zhì)量，所用的色譜條件可以實(shí)現(xiàn)全反式葉黃素及其主要的順式異構(gòu)體及同分異構(gòu)體的有效分離，而且還能對(duì)全反式葉黃素進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種一種測(cè)定葉黃素成分的方法。

背景技術(shù)

葉黃素(lutein)是一種屬于類胡蘿卜素的黃色物質(zhì)，廣泛存在自然界中，在人體內(nèi)，存在于血漿和眼睛的黃斑區(qū)，能夠大量吸收藍(lán)光，避免視網(wǎng)膜的光氧化損傷，同時(shí)作為一種抗氧化劑，能夠清除自由基，保護(hù)視神經(jīng)免受自由基的損害，因此被廣泛應(yīng)用于各種保健食品、食品及藥品中。葉黃素的分子結(jié)構(gòu)因具有多個(gè)共軛雙鍵結(jié)構(gòu)，易受光、氧、高溫等因素的影響，在理論上可以存在多個(gè)異構(gòu)體，包括順式異構(gòu)及其同分異構(gòu)玉米黃質(zhì)等。

在生物體內(nèi)，不同異構(gòu)體的生物活性不同，反式構(gòu)象的生物活性也較順式構(gòu)象高很多，導(dǎo)致其生物學(xué)功能或效價(jià)差異顯著，一旦葉黃素在制備和應(yīng)用的過(guò)程中受到光照、加熱、氧氣等因素的影響，則不可避免地影響以葉黃素為主要活性成分的產(chǎn)品的質(zhì)量。目前很少有人監(jiān)測(cè)在葉黃素提取、制劑過(guò)程中順式異構(gòu)體的變化，特別是以葉黃素為原料的保健食品及食品普遍以總?cè)~黃素含量的高低來(lái)評(píng)價(jià)產(chǎn)品的質(zhì)量，使得產(chǎn)品的質(zhì)量難以得到保障。現(xiàn)有的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)以純度為總?cè)~黃素含量的對(duì)照品，以反式葉黃素及其順式異構(gòu)體及同分異構(gòu)體的總和作為定量指標(biāo)，并且反式葉黃素及其順式異構(gòu)體及同分異構(gòu)體未得到理想的分離，見(jiàn)圖1，在其異構(gòu)化的標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖中，只可見(jiàn)三個(gè)色譜峰，并未見(jiàn)理論上存在或有關(guān)文獻(xiàn)的多個(gè)順式異構(gòu)體及同分異構(gòu)體，使得現(xiàn)有方法對(duì)葉黃素質(zhì)量監(jiān)控有很大的局限性。不僅如此，標(biāo)準(zhǔn)中該供試品制備方法相當(dāng)繁瑣，因而增加了葉黃素質(zhì)量控制的成本。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明旨在提出一種以葉黃素為原料的保健食品、食品、藥品及葉黃素原料中全反式葉黃素及異構(gòu)體的定性或定量方法。具體地，本發(fā)明提出了一種測(cè)定葉黃素成分的方法，該方法采用高效液相色譜檢測(cè)，其中，色譜條件包括：以YMC Carotenoid C30為色譜柱；以甲醇/水為流動(dòng)相A，甲基叔丁基醚為流動(dòng)相B；洗脫程序?yàn)?min～30min、0％～50％B，30min～40min、50％B；所述甲醇/水的比例為88～100:12～0。

優(yōu)選地，甲醇/水的比例為92～100:8～0；更優(yōu)選地，甲醇/水的比例為95:5。

進(jìn)一步地，所述流動(dòng)相A和/或所述流動(dòng)相B中包含2，6-二叔丁基對(duì)甲酚。

優(yōu)選地，所述2，6-二叔丁基對(duì)甲酚的濃度為0.1％。

進(jìn)一步地，所述色譜條件包括：流速為0.7mL/min～1.1mL/min；柱溫25℃～40℃。

進(jìn)一步地，前述測(cè)定葉黃素成分的方法中，色譜條件包括：以規(guī)格為250mm×4.6mm,5μm的YMC Carotenoid C30為色譜柱；以含0.1％的2，6-二叔丁基對(duì)甲酚、比例為95:5的甲醇/水溶液為流動(dòng)相A，以甲基叔丁基醚為流動(dòng)相B，洗脫程序?yàn)?min～30min、0％～50％B，30min～40min、50％B；流速為0.8mL/min，柱溫為30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為445nm。

可選地，如前所述葉黃素成分包括但不限于全反式葉黃素。

本發(fā)明還提出一種檢測(cè)葉黃素原料(如：葉黃素微粒)或含葉黃素的樣品的方法，其特征在于，該方法包括：

供試品溶液的制備：將葉黃素微粒或含葉黃素的樣品研細(xì)，取粉末置于容量瓶中，加入水，于室溫下超聲處理，再加入含BHT的無(wú)水乙醇，超聲處理，冷卻至室溫，定容；