[發(fā)明專利]一種寡糖的液相色譜分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911029069.6
• 申請日: 2019-10-28
• 公開（公告）號: CN112730635A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁鑫淼;夏東海;郭志謀;金高娃;閆競宇
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/74;G01N30/34;G01N30/30;G01N30/28;G01N30/88;G01N30/64;G01N30/72
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發(fā)明涉及一種寡糖的液相色譜分析方法。其特征是：在高pH、高柱溫條件下，采用親水色譜模式對寡糖進行分析。本方法通過在流動相中添加低末端吸收的堿性添加劑，以增強寡糖的紫外信號。本方法在高pH、高柱溫條件下進行，加速了還原糖的變旋，使較寬的差向異構(gòu)分裂峰變成窄的單峰。本發(fā)明在增強了寡糖紫外信號的同時，還具有不產(chǎn)生異構(gòu)峰的優(yōu)點，這對寡糖的色譜定性、定量分析及其分離純化具有十分重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物化學(xué)分析檢測領(lǐng)域，涉及一種寡糖的液相色譜分析方法。

技術(shù)背景

寡糖又稱低聚糖，是由2-10個單糖分子通過糖苷鍵聚合而成的碳水化合物(DairyScience and Technology,second edition,2008.)。寡糖具有抗腫瘤、抗氧化、抗病毒感染、降血糖和降血脂、調(diào)節(jié)腸道菌群和增強免疫力等多種生物活性(山東化工,2015,44:40-45.)。常見的寡糖有殼寡糖、母乳寡糖、果寡糖和阿卡波糖等。不同寡糖的區(qū)別主要是單糖組成、連接方式和聚合度的不同，而寡糖的種類和來源又會直接影響其生物活性，因此寡糖的分析對其生物活性的研究具有十分重要的意義。

液相色譜分析是寡糖分析的一種重要手段。鑒于寡糖本身無紫外吸收或紫外吸收較弱，多采用衍生化法(生物化工,2019,5(3):16-19.)引入發(fā)色團以滿足其紫外檢測的需求，然后采用親水色譜柱或反向色譜柱予以分離。但衍生化法不僅操作繁瑣費時，而且衍生化后寡糖異構(gòu)體的特征碎片往往會消失。

采用親水色譜柱直接對還原糖進行分析則會克服上述缺點，但需要使用電噴霧檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、示差折光檢測器或質(zhì)譜檢測器等通用型檢測器。而在檢測器條件受限的情況下，如在只有紫外檢測器時則需要選擇低末端吸收的添加劑以增強寡糖的紫外信號。此外，在還原糖的分析中，其α型和β型變旋所產(chǎn)生的差向異構(gòu)體也會被色譜柱分離，呈寬的分裂峰，這將影響色譜柱的峰容量和還原糖之間的分離度。因此，需要開發(fā)一種末端吸收弱且能同時控制差向異構(gòu)體分離的寡糖的液相色譜分析方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種寡糖的液相色譜分析方法，在增強了寡糖紫外信號的同時，還具有不產(chǎn)生異構(gòu)峰的優(yōu)點，這對寡糖的色譜定性、定量分析及其分離純化具有十分重要的意義。

為實現(xiàn)上述目標，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：在高pH、高柱溫條件下，采用親水色譜模式對寡糖進行分析。

所述pH為8～12，通過在流動相中添加堿性添加劑進行調(diào)節(jié)。

其中，所述流動相為有機相和水相。有機相為乙腈、乙醇、甲醇等中的一種或多種組合。

其中，堿性添加劑的添加方式為在兩相中分別添加或在任意一相中添加。堿性添加劑的種類、濃度及其pH如下：

a)氨水，質(zhì)量分數(shù)0.0001～30％；

b)三乙胺，體積分數(shù)0.0001～100％；

c)磷酸銨緩沖鹽，濃度1-200mM，pH 8-12；

d)磷酸三乙胺緩沖鹽，濃度1-200mM，pH 8-12；

e)甲酸銨緩沖鹽，濃度1-200mM，pH 8-12；

f)乙酸銨緩沖鹽，濃度1-200mM，pH 8-12；

g)碳酸氫銨緩沖鹽，濃度1-200mM，pH 8-12。

所述柱溫為40～90℃。

所述親水色譜柱為硅膠或鍵合有極性官能團的耐堿親水色譜柱。

其中，極性鍵合基團為酰胺、氨基酸、氨基、羧基、糖基和兩性離子等中的一種或幾種。