[發明專利]一種捕獲循環腫瘤細胞的方法有效
| 申請號： | 201911028894.4 | 申請日： | 2019-10-28 |
| 公開（公告）號： | CN110747169B | 公開（公告）日： | 2023-04-07 |
| 發明（設計）人： | 程國鋼;趙剛;馬潔 | 申請（專利權）人： | 天津市康婷生物工程集團有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/09 | 分類號： | C12N5/09;H01F41/02 |
| 代理公司： | 天津盛理知識產權代理有限公司 12209 | 代理人： | 劉丹舟 |
| 地址： | 300200 天津市*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 捕獲 循環 腫瘤 細胞 方法 | ||
1.一種非診斷目的的捕獲循環腫瘤細胞的方法，其特征在于：包括如下步驟：
(1)將磁珠和抗腫瘤細胞抗體混合后加入NHS和EDC的混合物，孵育過夜即得免疫功能磁珠；
(2)將步驟(1)中的免疫功能磁珠與待測血液加入離心管中混合孵育，而后將離心管移至磁場中，棄掉廢液即得循環腫瘤細胞，
所述步驟(1)中的抗腫瘤細胞抗體為上皮細胞粘附分子EpCAM，表皮生長因子受體her2或前列腺特異性膜抗原PSMA中的一種，抗體的量都為6μg抗體/mg磁珠，
所述的磁珠制備方法包括如下步驟：
(1)將二氧化硅微球中加入PEI后加入NHS和EDC的混合物，孵育過夜；
(2)將步驟(1)中過夜產物離心，沉淀轉移至己醇中加入量子點Fe3O4，繼而再加入PEI孵育，離心收集沉淀；
(3)重復反應5次，將沉淀產物中加入PEG水溶液孵育即得到最終的水溶性磁珠，
磁珠制備方法步驟(1)中的二氧化硅微球為羧基修飾，粒徑在500nm；
磁珠制備方法步驟(1)中的PEI為聚醚酰亞胺Polyetherimide,分子量小于25kDa；
磁珠制備方法步驟(1)中的二氧化硅微球與PEI的摩爾比為1:5，孵育過夜的條件為4℃、搖床、14h以上。
2.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的捕獲循環腫瘤細胞的方法，其特征在于：
磁珠制備方法步驟步驟(1)中的NHS為N-羥基琥珀酰亞胺N-Hydroxysuccinimide，分子量為115.09
磁珠制備方法步驟步驟(1)中的EDC為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，分子量為191.04。
3.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的捕獲循環腫瘤細胞的方法，其特征在于：磁珠制備方法步驟步驟(2)中的孵育時間為2.5～20min。
4.根據權利要求3所述的一種非診斷目的的捕獲循環腫瘤細胞的方法，其特征在于：優選的孵育時間為15min。
5.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的捕獲循環腫瘤細胞的方法，其特征在于：
磁珠制備方法步驟步驟(2)中的量子點Fe3O4，粒徑為30nm，加入PEI孵育的條件為37℃、搖床、2h以上；
磁珠制備方法步驟步驟(2)中離心條件為1000g/min離心3min。
6.根據權利要求1所述的一種非診斷目的的捕獲循環腫瘤細胞的方法，其特征在于：
磁珠制備方法步驟步驟(3)中重復反應5次即量子點Fe3O4的層數為6層；
磁珠制備方法步驟步驟(3)中PEG的分子量為3500，PEG水溶液濃度為10％；
磁珠制備方法步驟步驟(3)中水溶性磁珠最終保存在1xPBS中。
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