[發(fā)明專利]一種早期結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志物circ4953及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911028242.0
• 申請日: 2019-10-28
• 公開（公告）號: CN110592221B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫振強(qiáng);郭雅欣;汲翔;袁維堂;汲振余;陳晨;范丹丹;劉金波;趙陸洋;邵博
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 鄭州浩德知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 41130
• 代理人: 王國旭

本發(fā)明一種早期結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志物，所述診斷標(biāo)志物為環(huán)狀RNA?circ4953，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示，環(huán)狀RNA?circ4953在制備早期結(jié)直腸癌診斷工具中的應(yīng)用，所述工具為試劑盒，所述工具包括用來擴(kuò)增特異性識別環(huán)狀RNA?circ4953的核酸序列的引物對；能夠明確清楚地表征早期結(jié)直腸腫瘤疾病的發(fā)生，該標(biāo)志物在多個(gè)早期CRC組織樣本中的表達(dá)顯著高于在對照組織樣本（距離腫瘤組織5cm的正常組織）中的表達(dá)；且該標(biāo)志物在多個(gè)早期CRC患者血清樣本中的表達(dá)顯著高于在對照的健康血清樣本中的表達(dá)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及腫瘤標(biāo)志物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種早期結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志物circ4953及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)直腸癌（CRC）是消化系統(tǒng)的高發(fā)腫瘤，其惡性程度高并嚴(yán)重影響患者的生存期。研究表明，CRC的早期診斷可以顯著提高患者的5年生存率，但早期特異性標(biāo)志物的缺乏導(dǎo)致CRC的早期診斷和治療嚴(yán)重不足。因此，尋找早期CRC的診斷標(biāo)志物是迫切和必要的。

環(huán)狀RNA（circRNA）是一種特殊類型的非編碼RNA，在疾病中起著重要的調(diào)節(jié)作用。作為腫瘤生物標(biāo)志物，circRNA具有許多優(yōu)點(diǎn)。CircRNA具有閉和環(huán)狀結(jié)構(gòu)，不易被核酸外切酶降解，比線性RNA更穩(wěn)定。此外，circRNA在真核細(xì)胞中廣泛存在，具有一定的組織特異性，時(shí)空特異性和疾病特異性，其中大多數(shù)是高度保守的。研究發(fā)現(xiàn)，circRNA與腫瘤TNM分型密切相關(guān)。此外，circRNA可以在外泌體和體液如外周血和尿液中檢測到。最近的一些研究證實(shí)，circRNA在早期腫瘤的診斷中具有良好的敏感性和特異性。這些都表明circRNA作為腫瘤的生物標(biāo)志物具有諸多優(yōu)勢。

因此，本研究基于高通量測序的結(jié)果，篩選出在早期CRC中特異性高表達(dá)的分子circ4953，通過在組織和血清樣本中驗(yàn)證其表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)circ4953有潛力作為早期CRC的標(biāo)志物，并有希望應(yīng)用于早期CRC的大規(guī)模人群篩查。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種早期結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志物circ4953及其應(yīng)用，本發(fā)明公開了一種新的外周血來源的circRNA?4953用于診斷早期結(jié)直腸癌的標(biāo)志物，能夠明確清楚地表征早期結(jié)直腸腫瘤疾病的發(fā)生，該標(biāo)志物在多個(gè)早期CRC組織樣本中的表達(dá)顯著高于在對照組織樣本（距離腫瘤組織5cm的正常組織）中的表達(dá)；且該標(biāo)志物在多個(gè)早期CRC患者血清樣本中的表達(dá)顯著高于在對照的健康血清樣本中的表達(dá)。

本發(fā)明一種早期結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志物，所述診斷標(biāo)志物為環(huán)狀RNA?circ4953，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

環(huán)狀RNA?circ4953在制備早期結(jié)直腸癌診斷工具中的應(yīng)用。

進(jìn)一步的，所述工具為試劑盒。

進(jìn)一步的，所述工具包括用來擴(kuò)增特異性識別環(huán)狀RNA?circ4953的核酸序列的引物對。

進(jìn)一步的，所述引物對包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示，circRNA引物的設(shè)計(jì)不同于普通線性RNA，是針對circRNA的back-spliced?junction位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性的引物（divergent?primers）。

所述的試劑盒的制備可采用本領(lǐng)域已知的生物試劑盒的常規(guī)制造方法，本發(fā)明中的circ4953可以是天然的或是人工合成的。

本發(fā)明至少具有以下優(yōu)點(diǎn)：