[發明專利]治療和預防痛風及其它尿酸結晶相關病癥的蔬菜活性組分、成品及其制備方法

在審

• 申請號: 201911026308.2
• 申請日: 2019-10-25
• 公開（公告）號: CN110810839A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 王曉
• 申請（專利權）人: 浙江府衡生物科技有限公司
• 主分類號: A23L33/105
• 分類號: A23L33/105
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 陳輝

1.治療和預防痛風及其它尿酸結晶相關病癥的蔬菜活性組分的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟一：選取新鮮蔬菜，對新鮮蔬菜施加機械損傷作用，使新鮮蔬菜引發應激反應；

步驟二：先將磷酸鹽緩沖液A加入經過機械損傷作用的新鮮蔬菜中，再采用勻漿器將磷酸鹽緩沖液A與新鮮蔬菜形成的混合物制成勻漿，再將勻漿煮沸后冰浴至0-4℃，然后通過離心力對勻漿進行離心作用并得到第一次上清液，取出第一次上清液之后得到沉淀物；

步驟三：先將沉淀物加入非離子型表面活性劑中使沉淀物懸浮，再加入磷酸鹽緩沖液A形成混合液，再將混合液冰浴至0-4℃并進行攪拌，然后通過離心力對混合液進行離心作用并得到第二次上清液，取出第二次上清液；

步驟四：將第一次上清液和第二次上清液混合合并形成上清液；

步驟五：分別將DEAE陰離子交換層析樹脂、CM陽離子交換樹脂、疏水層析介質在磷酸鹽緩沖液A中進行酸堿度平衡處理之后，分別得到酸堿度平衡處理之后的DEAE陰離子交換層析樹脂、CM陽離子交換樹脂、疏水層析介質；

步驟六：將酸堿度平衡處理之后的DEAE陰離子交換層析樹脂加入到混合合并的上清液中并進行攪拌，再用濾紙過濾之后得到濾液B，然后回收DEAE陰離子交換層析樹脂；將酸堿度平衡處理之后的CM陽離子交換樹脂加入到濾液B中并進行攪拌，再用濾紙過濾之后得到濾液C，然后回收CM陽離子交換樹脂；將酸堿度平衡處理之后的疏水層析介質加入到濾液C中并進行攪拌，再用濾紙過濾，然后回收疏水層析介質；

步驟七：將步驟六中回收的DEAE陰離子交換層析樹脂、CM陽離子交換樹脂、疏水層析介質裝入層析柱中；

步驟八：采用磷酸鹽緩沖液D對層析柱進行NaCl濃度梯度洗脫，收集若干份洗脫液，得到不同的蔬菜組分，然后采用離心式凝膠層析的方法分別對每份蔬菜組分進行純化處理；

步驟九：依次按步驟一、步驟二的方法制備得到勻漿，然后向步驟八制得的每份蔬菜組分加入勻漿，并混合靜置后形成對應的若干份混合液，然后采用大鼠氣囊注射尿酸單鈉結晶痛風模型檢測每份混合液的活性，得到蔬菜活性組分。

2.根據權利要求1所述的治療和預防痛風及其它尿酸結晶相關病癥的蔬菜活性組分的制備方法，其特征在于：步驟七中的將步驟六中回收的DEAE陰離子交換層析樹脂、CM陽離子交換樹脂、疏水層析介質裝入層析柱中的具體方法如下：將步驟六中回收的DEAE陰離子交換層析樹脂、CM陽離子交換樹脂、疏水層析介質依次裝入同一個層析柱中，DEAE陰離子交換層析樹脂裝在層析柱的底部，CM陽離子交換樹脂疊加在DEAE陰離子交換層析樹脂上面，疏水層析介質疊加在CM陽離子交換樹脂上面，層析柱形成DEAE陰離子交換層析樹脂位于最下層、CM陽離子交換樹脂位于中間層、疏水層析介質位于位于最上層的結構。

3.根據權利要求1所述的治療和預防痛風及其它尿酸結晶相關病癥的蔬菜活性組分的制備方法，其特征在于：步驟七中的將步驟六中回收的DEAE陰離子交換層析樹脂、CM陽離子交換樹脂、疏水層析介質裝入層析柱中的具體方法如下：將步驟六中回收的DEAE陰離子交換層析樹脂、CM陽離子交換樹脂、疏水層析介質分別裝在各一個層析柱中；步驟八中的采用磷酸鹽緩沖液D對層析柱進行洗脫處理的具體方法如下：磷酸鹽緩沖液D先進入疏水層析介質所在的層析柱，再進入CM陽離子交換樹脂所在的層析柱，然后進入DEAE陰離子交換層析樹脂所在的層析柱。

4.根據權利要求1或2或3所述的治療和預防痛風及其它尿酸結晶相關病癥的蔬菜活性組分的制備方法，其特征在于：非離子型表面活性劑為聚山梨醇酯(polysorbate)-20或聚山梨醇酯-40或聚山梨醇酯-60或聚山梨醇酯-80。

5.根據權利要求4所述的治療和預防痛風及其它尿酸結晶相關病癥的蔬菜活性組分的制備方法，其特征在于：疏水層析介質為苯基瓊脂糖凝膠或丁基瓊脂糖凝膠或辛基瓊脂糖凝膠。

6.根據權利要求1或2或3或5所述的治療和預防痛風及其它尿酸結晶相關病癥的蔬菜活性組分的制備方法，其特征在于：磷酸鹽緩沖液D由磷酸鹽緩沖液A添加梯度濃度為10-1000mM的NaCl形成，步驟八中的洗脫處理在10-20小時內完成。