[發明專利]一種阿膠多肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201911024701.8
• 申請日: 2019-10-25
• 公開（公告）號: CN110790819B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 楊方;熊雅茹
• 申請（專利權）人: 福州海關技術中心
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;C12P21/06;A61P39/06;A61P7/02
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

本發明公開了一種阿膠多肽及其制備方法，屬于分析化學技術領域。所述阿膠多肽的氨基酸序列為YQCLKGTGK、CTTPPPSSGPKYQCLK、MDNPDTFYSLKYQIK、FAAFIDK、ANKGFLEEVR中的一種。所屬阿膠多肽的制備方法為阿膠研磨成粉燉化制得阿膠提取液，然后經胰蛋白酶酶解、固相萃取柱分離純化，液相色譜?質譜聯用檢測分析合成獲得。本發明的阿膠多肽有羥基自由基清除活性和抗凝血活性，并且阿膠多肽呈濃度?功效相關性。

技術領域

本發明屬于分析化學技術領域，具體涉及一種阿膠多肽及其制備方法。

技術背景：

阿膠是我國傳統名貴中藥，與人參、鹿茸并稱“中藥三寶”，迄今已有3000年的藥用歷史，同時也被我國列為具有免疫調節及改善營養性貧血功能的藥食同源產品，長期以來深受人們喜愛。

阿膠以馬科動物驢的皮去毛熬制成而成，我國諸版藥典均以驢皮制膠為“阿膠”。根據《中華人民共和國藥典》（2015版），阿膠的功能有補血滋陰、潤燥、止血。

近年來，研究人員應用了多種技術手段以期揭示阿膠的功效作用。然而，對阿膠化學成分的研究并未發現阿膠中含有明確具有藥理作用的物質，現有的文獻針對的都是阿膠本身進行的功效研究，也因此對于阿膠功效出現爭議。阿膠的基本成分是驢皮所含原膠原的降解物，蛋白類含量約60% ~ 80%左，蛋白經酶解后生成的肽涉及生物體內多種細胞功能的生物活性，是機體完成各種復雜的生理活性必不可少的參與者，涉及激素、神經、細胞生長和生殖各領域，細胞的功能活動受肽的調節。阿膠作為藥品或食品服用后，進入人體經消化過程同樣是酶解成肽后被再人體吸收，因此，以肽為目標物對阿膠功效進行評價是科學可行的。基于此考慮，本發明提出了一種通過分離遴選阿膠中的肽段，以考察肽段的活性來驗證阿膠功效的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種阿膠多肽及其制備方法。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種阿膠多肽，其氨基酸序列為：YQCLKGTGK、CTTPPPSSGPKYQCLK、MDNPDTFYSLKYQIK、FAAFIDK、ANKGFLEEVR中的一種。

上述一種阿膠多肽的制備方法，包括以下步驟：

（1）阿膠提取液的制備：阿膠研磨成粉，加去離子，在一定溫度下燉化，冷卻后冷藏過夜，離心取燉化液上清，制得阿膠提取液；

（2）阿膠多肽的制備：步驟（1）的阿膠提取液經胰蛋白酶酶解，取酶解液上清，經C18固相萃取柱分離純化，洗脫液干燥后再溶解過0.45 μm濾膜，得阿膠多肽；

（3）步驟（2）制備所得阿膠多肽以液相色譜-質譜聯用進行檢測；

（4）步驟（3）的檢測結果進行數據分析,合成阿膠多肽氨基酸序列。

上述步驟（1）阿膠提取液的制備，具體為：阿膠研細成阿膠粉，加入20倍重量的去離子水，80℃燉化30 min，冷卻后冷藏過夜，將燉化液于4℃以18000rpm離心5min，取上清液過濾后，得阿膠提取液。

上述步驟（2）阿膠多肽的制備，具體為：步驟（1）制備的阿膠提取液以10 % NaOH溶液調節pH =7.5，40℃水浴中以濃度為3×10⁴ U/g~6×10⁴ U/g胰蛋白酶酶解，酶解過程中每隔1 h調節一次pH，使pH值始終保持在7.5；酶解4 h后滅酶活，冷卻后于4℃以18000rpm離心5min，取上清液3mL過C18固相萃取柱分離純化（預先以3 mL甲醇、3 mL去離子水活化），以3×3 mL甲醇洗脫，收集洗脫液，45℃氮吹干，以1 mL 1 %甲酸溶液溶解，過0.45 μm濾膜，得阿膠多肽。