[發明專利]用于PCOS診斷的顆粒細胞生物標志物及其篩選方法和診斷試劑盒

在審

• 申請號: 201911023570.1
• 申請日: 2019-10-25
• 公開（公告）號: CN110747269A
• 公開（公告）日: 2020-02-04
• 發明（設計）人: 康亞妮;毛湛睿;趙暉
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 31225 上海科盛知識產權代理有限公司
• 代理人: 蔣亮珠

本發明涉及一種用于PCOS診斷的顆粒細胞生物標志物及其篩選方法和診斷試劑盒，采用RNA?seq、miRNA?seq與MBD?seq技術聯合分析的方法，在全基因組范圍內篩選PCOS相關生物標志物，并發現了新的診斷標志物。標志物包括miR?429，miR?141?3p，和miR?126?3p；和/或，XIAP基因，BRD3基因，MAPK14基因和SLC7A5基因。與現有技術相比，本發明具有檢測靈敏性和精確度高等優點。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其是涉及一種用于PCOS診斷的顆粒細胞生物標志物及其篩選方法和診斷試劑盒。

背景技術

多囊卵巢綜合癥(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一種育齡婦女常見的內分泌、代謝紊亂疾病。該疾病最常見的臨床表現是女性出現高雄激素血癥，導致月經紊亂、稀少、閉經或不規則陰道出血、不孕、肥胖、多毛、子宮內膜過度增生及惡性變化、以及雙側或單側卵巢呈多囊性改變并多伴有肥胖表型；在糖脂內分泌代謝方面出現胰島素抵抗，繼而引發糖尿病等并發癥，遠期并發癥還包括心血管疾病和子宮內膜癌等。根據鹿特丹ESHRE/ASRM(2003)標準，我國PCOS患病率在5.6％左右。PCOS的臨床表現存在異質性，在基礎研究方面該病的相關機制研究一直是熱點和難點。目前普遍認為PCOS是由環境因素及遺傳因素等共同導致的一種涉及多的組織、器官、系統代謝綜合征。

目前的研究表明，年齡、環境/生活方式、疾病狀態等多種因素的影響可以通過表觀遺傳修飾改變多囊卵巢綜合征的臨床表現。DNA甲基化和microRNAs(miRNAs)是基因表達調控中兩種主要的表觀遺傳修飾。miRNAs是一種轉錄后負調控基因表達的非編碼小RNA，通過調控靶基因的轉錄表達廣泛參與機體生長、發育和疾病發生等各種生命過程。同時，異常的DNA甲基化表現在全局基因組的穩定性保存和局部基因啟動子的改變上，影響致病基因的轉錄水平。研究表明，與正常人相比，PCOS患者的卵泡、卵巢顆粒細胞及脂肪組織等中存在明顯的全基因組DNA甲基化和miRNA表達的模式變化。

雖然在PCOS中miRNA和DNA甲基化的表觀遺傳調控作用都分別得到了廣泛的研究，但miRNA與DNA甲基化的相互作用機制仍未被發現。DNA甲基化通過超/低甲基化miRNA啟動子區域來調控miRNA的轉錄。同時，miRNA可以通過直接靶向DNA甲基轉移酶和甲基化相關的關鍵蛋白來調控全基因組的DNA甲基化模式。

目前關于PCOS的分子診斷標志物有代謝產物、卵泡數目、SNP標記等。公告號為CN104411824B的已授權專利公開了一種由至少15個SNP標記組成的，用于預測PCOS風險的探針組。公告號為CN106442764A的已授權專利公開了一組由環磷酸鳥苷、硫酸脫氫表雄酮、棕櫚鞘磷脂聯合高密度脂蛋白膽固醇和左卵泡數目組成的聯合標志物，作為PCOS的診斷、分型標志物的制備和應用。

但是上述兩件專利公開的技術存在以下主要缺點：傳統的多囊卵巢綜合征診斷主要依靠臨床表現、雄激素水平檢測和卵巢B超檢測。根據鹿特丹ESHRE/ASRM(2003)標準，須滿足下述三項中的兩項：月經稀發；臨床或者生化雄激素過多癥；雙側或單側卵巢多囊樣改變和/或體積增大。但上述技術不易檢測到癥狀不明顯的多囊卵巢綜合征患者，靈敏度和精準性較低。隨著生物技術的發展，生物標志物為PCOS的診斷提供了一種新的途徑。

發明內容

本發明的目的就是為了克服上述現有技術存在的缺陷而提供一種靈敏度和精準性高的用于PCOS診斷的顆粒細胞生物標志物及其篩選方法和診斷試劑盒。

本發明的目的可以通過以下技術方案來實現：

本發明提供了一種用于PCOS診斷的顆粒細胞生物標志物，其特征在于，包括miR-429，miR-141-3p，和miR-126-3p；和/或，XIAP基因，BRD3基因，MAPK14基因和SLC7A5基因。