[發(fā)明專利]一種非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜基因及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911014516.0
• 申請(qǐng)日: 2019-10-23
• 公開（公告）號(hào): CN110628783A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡茂龍;浦惠明;龍衛(wèi)華;高建芹;張潔夫;郭月;彭琦;陳鋒;周曉嬰;張維;王曉東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N15/29
• 分類號(hào): C12N15/29;C07K14/415;C12N15/11;C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 32204 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 王艷

1.一種非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜突變型基因，其特征在于，所述突變型基因僅在BnALS1基因片段的第1696位堿基由G突變?yōu)門。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜突變型基因，其特征在于，所述突變型基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.含有權(quán)利要求1或2所述的突變型基因編碼的突變蛋白，其特征在于，所述氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.用于擴(kuò)增權(quán)利要求1或2所述的突變型基因片段的等位特異性引物對(duì)，其特征在于，所述引物對(duì)序列如SEQ ID NO:3所示和SEQ ID NO:4所示。

5.權(quán)利要求1或2所述的突變型基因，權(quán)利要求3所述的突變型蛋白，權(quán)利要求4所述的等位特異性引物對(duì)在選育抗芐嘧磺隆植物中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述植物為油菜、擬南芥或煙草。

7.一種檢測(cè)非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜基因的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）以待測(cè)甘藍(lán)型油菜總DNA為模板，用權(quán)利要求4所述的等位特異性引物對(duì)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增；

2）將PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物用限制性核酸內(nèi)切酶BsrDI消化；

3）將消化的酶切產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳檢測(cè)，如果電泳檢測(cè)的酶切產(chǎn)物只含有一種條帶時(shí)，則為含非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜基因的純合型抗性油菜；如果電泳檢測(cè)的酶切產(chǎn)物含有三種條帶時(shí)，則為含非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜基因雜合型抗性油菜；如果電泳檢測(cè)的酶切產(chǎn)物含有兩種條帶時(shí)，則為不含非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜基因的純合型敏感性油菜。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種檢測(cè)非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜基因的方法，其特征在于，所述步驟1）中PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系如下：20 ng DNA，0.5μmol/L 引物，1×酶反應(yīng)緩沖液，1.5mmol/L MgCl₂，0.2 mmol/L dNTP，0.5 U Taq酶。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種檢測(cè)非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜基因的方法，其特征在于，所述步驟1）中PCR擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種檢測(cè)非轉(zhuǎn)基因抗除草劑油菜基因的方法，其特征在于，所述步驟2）中酶切反應(yīng)體系：PCR產(chǎn)物5.0 μL，10×酶反應(yīng)緩沖液2.5 μL，BsrDI內(nèi)切酶0.5μL，水17.0 μL，65 ℃下反應(yīng)3～5 h。