[發明專利]產褐藻膠裂解酶的黃桿菌及其應用

有效

• 申請號: 201911010492.1
• 申請日: 2019-10-21
• 公開（公告）號: CN110607266B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 嚴芬;王梅;陳星杭;蔡婷;翁祖銓
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/88;C12R1/01
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

本發明提供一種產褐藻膠裂解酶的黃桿菌及其應用。所述的黃桿菌B2，保藏編號為CGMCC No.17354。該黃桿菌B2的菌落顏色為黃色，菌落相連，不形成芽孢，不運動，革蘭氏陰性菌。所述的黃桿菌是從腐爛的海帶中篩選到的，用于產褐藻膠裂解酶，褐藻膠裂解酶的酶活力達到53 U/mL，該酶能夠降解褐藻膠，其降解產物為褐藻寡糖，該降解菌的發現對褐藻膠裂解酶及后期褐藻寡糖的制備具有一定的商業價值。

技術領域

本發明屬于微生物發酵領域，具體涉及產褐藻膠裂解酶的黃桿菌及其應用。

背景技術

褐藻寡糖是褐藻膠經降解得到的寡聚物，由古羅糖醛酸（G）和甘露糖醛酸（M）組成。由于褐藻寡糖具有多種生理活性，如：抗菌、抗氧化、抗腫瘤、抗衰老及促進植物生長的作用，近年來被越來越廣泛的應用于食品、醫藥和農業等領域，具有巨大的經濟價值與應用前景。

目前褐藻寡糖的制備方法通常由酸降解法，酶降解法，氧化降解法。酸降解法是較為常用的方法，其降解產物能維持褐藻膠的自身結構特征，不會產生酶解生成的不飽和雙鍵和氧化降解產物的羧基。氧化降解制備的褐藻寡糖，其還原端1位的醛基易被氧化為羧基，而導致環的破裂。酶作為高效的生物催化劑，其在醫藥、食品、農業等各個領域內被廣泛使用。生物酶法因其操作簡便、反應溫和、環境污染小等優點被廣泛應用于寡糖制備。近年來，已有研究報道有多種微生物能發酵生產褐藻膠裂解酶，如：產微球莖菌（Microbulbifer）、假交替單胞菌（Pseudoalteromonas）、芽孢桿菌(Bacillus)、弧菌（Vibrio）等。目前大部分菌株產褐藻膠裂解酶的活力低，發酵周期長，從而無法使褐藻膠裂解酶菌株應用到實際發酵生產中。本發明提供一種產褐藻膠裂解酶的黃桿菌，該菌株發酵生產的褐藻膠裂解酶，酶活力高達53U/mL，發酵效率高，為褐藻寡糖的制備奠定了一定的基礎。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一株產褐藻膠裂解酶的黃桿菌及其應用。本發明產褐藻膠裂解酶的黃桿菌，產酶量大，發酵效率高，在褐藻寡糖的制備中應用潛力大。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的目的之一在于提供了一株產褐藻膠裂解酶的黃桿菌，該菌株黃桿菌B2的分類命名為： Zobellia sp. B2，該菌株已于2019年03月18日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC No.17354。

上述黃桿菌B2在產褐藻膠裂解酶中的應用。

上述黃桿菌B2在產褐藻膠裂解酶中的應用，其黃桿菌產褐藻膠裂解酶的方法，包括以下步驟：

（1）黃桿菌B2菌液涂布到2216E固體平板培養基上，放置28℃生化培養箱中培養24h；

挑取平板上的黃桿菌進行三區劃線，將三區劃線后的平板放置28℃生化培養箱中培養24h；

挑取平板上的黃桿菌接種于裝有2216E液體培養基的錐形瓶中進行培養，在28℃，轉速為180rpm的搖床上培養12-16h至對數中后期，得到種子液；

（2）將步驟（1）制備的種子液接種于裝有發酵培養基的錐形瓶中進行培養，在28℃，pH 7.2，轉速為180rpm的搖床上培養36h，得到褐藻膠裂解酶發酵液。

上述步驟（1）中所述2216E固體平板培養基配方為：蛋白胨5g/L、酵母粉1g/L、六水合氯化鐵0.0018g/L，氯化鈉 26.5g/L、氯化鉀0.9g/L、氯化鈣1.03g/L、七水硫酸鎂4.2g/L，瓊脂20g/L；2216E固體平板培養基配方中不添加瓊脂為2216E液體培養基。