[發明專利]一種降低GVHD發病率的移植物

在審

• 申請號: 201911001427.2
• 申請日: 2019-10-21
• 公開（公告）號: CN110859856A
• 公開（公告）日: 2020-03-06
• 發明（設計）人: 吳勇君;江良旗;王俊
• 申請（專利權）人: 中冠賽爾生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: A61K35/51
• 分類號: A61K35/51;A61P37/06;C12N5/073;C12N5/0789;A61K35/50
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 杜立軍

本發明實施例公開了一種降低GVHD發病率的移植物，其特征在于，所述移植物通過將胎盤亞全能干細胞和臍帶血造血干細胞混合培養得到；本發明通過將胎盤亞全能干細胞和臍帶血造血干細胞共同培養制備得到移植物，通過將該移植物進行回輸，能夠有效降低CVHD的發變綠和發病程度。

技術領域

本發明實施例涉及造血干細胞移植技術領域，具體涉及一種降低GVHD發病率的移植物。

背景技術

移植物抗宿主疾病(GVHD)是骨髓移植后出現的多系統損害(皮膚、食管、胃腸，肝臟等)的全身性疾病，是造成死亡的重要原因之一。由于供受體之間存在著免疫遺傳學差異，移植骨髓中的免疫活性細胞(主要是T淋巴細胞)識別了受體的不同組織相容性抗原而增生分化，在受體內增生到一定程度后把受體的某些組織或器官作為靶目標進行免疫攻擊產生損害。

將同種反應性T淋巴細胞移植至免疫功能不健全的患者體內時，可能發生的一種潛在的可致死性臨床并發癥。供體T細胞一經被輸注至受體體內，就會識別宿主細胞抗原，導致影響肝臟、胃腸道和皮膚的免疫級聯反應。目前，GVHD的治療和預防方法包括移植后進行常規免疫抑制、低強度預處理及在輸注前耗竭或抑制同種反應性供體的T淋巴細胞。不過，這些方法的臨床效果受多種副作用的限制。例如，常規免疫抑制與增加再次感染病毒及機會性病毒感染的風險有關聯，而低強度預處理方案則與復發率增加有關聯。目前，耗竭或抑制供體T淋巴細胞是最具前景的GVHD預防性治療方法。通過淋巴細胞毒性劑、專用的T淋巴抑制劑及專門針對C0.9％NaCl生理鹽水34+造血干細胞和祖細胞(HSPC)選擇的T細胞耗竭劑等多種方法，可實現該目的。盡管人們已經證實，這些方法可有效地降低GVHD發病率，但是，它們會降低受體重構免疫系統的速度，增加患者出現致命感染的危險并可能具有限制移植物抗白血病的效果；此外，現有技術直接將造血干細胞移植，臨床GVHD發病率較高。

發明內容

為此，本發明實施例提供一種降低GVHD發病率的移植物，以解決現有技術中GVHD發病率較高的問題。

為了實現上述目的，本發明實施例提供如下技術方案：

根據本發明實施例的第一方面提供一種降低GVHD發病率的移植物，所述移植物通過將胎盤亞全能干細胞和臍帶血造血干細胞混合培養得到。

本發明通過將胎盤亞全能干細胞和臍帶血造血干細胞共同培養制備得到移植物，通過將該移植物進行回輸，能夠有效降低CVHD的發變綠和發病程度。

進一步地，所述胎盤亞全能干細胞和臍帶血造血干細胞的數量比為(4-6)∶1。

進一步地，所述培養具體為：

將胎盤亞全能干細胞和臍帶血造血干細胞的混合細胞按照2×10⁶cell/瓶進行接種，每個培養瓶中的培養體系為15mLDMEM F12+10ng/ml EGF+10ng/ml bFGF液，然后蓋蓋，再將培養瓶置5％CO₂、飽和濕度、37℃培養箱中培養。

進一步地，所述胎盤亞全能干細胞通過如下方法制得：

(a)選取胎盤羊膜并進行預處理；

(b)將清洗后的羊膜進行消化處理、過濾、離心、接種；

(c)對接種后的細胞進行培養擴增，即得所述胎盤亞全能干細胞。

進一步地，所述預處理為將羊膜置于含50mL 0.9％NaCl生理鹽水液的無菌小燒杯內，用鑷子反復涮洗后取出放入新的無菌燒杯中加入0.9％NaCl生理鹽水液再次涮洗，如此用0.9％NaCl生理鹽水清洗3次以上，去除溶血，再用鑷子將羊膜取出放置在腎形盤上，去除黏膜和溶血組織，將羊膜分成3-4cm大小方塊；再將處理后的羊膜移至含50mL0.9％NaCl生理鹽水液的新的無菌燒杯內，反復涮洗后放入新的燒杯中加入0.9％NaCl生理鹽水液再次涮洗，如此反復沖洗16次以上。