[發明專利]NK細胞外泌體hsa-miR-181a-2-3p在抗菌中的應用

有效

• 申請號: 201911001195.0
• 申請日: 2017-12-11
• 公開（公告）號: CN110613729B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 徐以兵;胡薇蕾;壽鑫;王國勝;陳海瓊
• 申請（專利權）人: 浙江大學;上海博慷生物科技有限公司
• 主分類號: A61K31/7105
• 分類號: A61K31/7105;A61K35/17;A61P31/04
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 邱啟旺

本發明公開了經跨膜IL?21激活的NK細胞(aNK)分泌的外泌體，及其包含的多種miRNA在抗菌中和抗腫瘤的應用，為治療細菌感染和抗腫瘤提供了新的思路。此方法：(1)不同于抗生素治療，外泌體抗菌具有較低的副作用；(2)可通過聯合使用增強抗菌治療效果；(3)外泌體可低溫儲存,miRNA可以人工合成，成本低，可以實現大規模的生產；(4)外泌體和多種miRNA對多種細菌均有抑制效果，具有寬泛的抗菌譜；(5)miRNA作用于多種腫瘤細胞共有的信號通路，能抑制多種腫瘤，具有寬泛的抗腫瘤應用。

本申請為申請號為2017113093652、申請日為2017年12月11日、發明名稱“NK細胞外泌體及相關miRNA在抗菌和抗腫瘤中的應用”的分案申請。

技術領域

本發明涉及通過經跨膜IL-21激活的NK細胞(aNK)分泌的外泌體(exosome)，以及相關的miRNA在抗菌中和抗腫瘤的應用。

背景技術

外泌體是一類由細胞分泌的攜帶胞質組分的納米級別的膜性小泡，由機體的多種細胞分泌，廣泛分布于唾液、血漿、乳汁等體液中。外泌體中含有蛋白質、mRNA和miRNA等多種生物活性物質。外泌體以膜融合的方式將miRNA和蛋白質傳遞給其他細胞，作為細胞之間相互交流的橋梁。

NK細胞是固有免疫系統中主要的效應細胞，已應用于腫瘤的治療，其通過釋放穿孔素和顆粒酶殺傷被感染或發生癌變的細胞。NK細胞分泌的外泌體含有部分NK細胞的活性物質，也具有抗腫瘤的能力。

NK細胞外泌體應用于臨床治療最大的瓶頸在于因為NK細胞在體外無法很好的擴增，從而無法獲取足夠數量的外泌體。為了解決這一問題，我們采用人工抗原呈遞細胞(genetically-engineered artificial antigen-presenting cells,aAPCs)表達的跨膜IL-21來刺激NK細胞的增殖，aNK細胞的擴增數量足以滿足臨床治療的需求。經過14-18天的激活和擴增，大量的外泌體由aNK細胞釋放進入培養液中，這部分aNK細胞外泌體擁有典型的NK細胞特征蛋白，并對多種腫瘤細胞均具有殺傷能力。

在過去數十年中，抗生素的廣泛使用使得微生物耐藥頻率和其與相關的嚴重感染性疾病的以令人擔憂的速度增加。在革蘭氏陽性菌中，最重要的耐藥性病原體是耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌、耐β-內酰胺的肺炎球菌和多藥耐藥性肺炎球菌，以及耐萬古霉素的腸球菌。肺炎克雷伯氏菌、大腸桿菌和奇異變形桿菌等革蘭氏陰性菌中的β-內酰胺酶耐藥性是造成革蘭氏陰性菌耐藥性的重要原因。因此臨床治療迫切需要新穎的抗菌劑，尤其具有新穎作用機制的抗菌劑。

本發明發現激活后的aNK細胞，其外泌體不僅富含NK細胞的胞漿成分，還富含大量的miRNA。這些miRNA在實驗中可以顯著的抑制細菌的生長，具有出色的抗菌功能，同時發現這些miRNA在實驗中可以抑制腫瘤細胞的生長，具有抗腫瘤的功能。

發明內容

本發明的目的在于提供aNK細胞分泌的外泌體，及其包含的miRNA在抗菌和抗腫瘤中的應用。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：一種經跨膜IL-21激活的NK細胞分泌的外泌體在抗菌中的應用。

進一步地，所述外泌體包含一條或一條以上選自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2144所示序列的miRNA。

進一步地，將所述外泌體單獨用于抗菌，或將所述外泌體與aNK細胞共同用于抗菌。

SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.1411所示的任一條miRNA。

SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2144所示的任一條miRNA在抗菌中的應用。

進一步地，用于制備抗菌制劑。