[發(fā)明專利]一種貝類血細(xì)胞胞外陷阱的誘導(dǎo)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910998502.0
• 申請(qǐng)日: 2019-10-21
• 公開（公告）號(hào): CN110484503B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊頂瓏;韓怡靜;趙建民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所
• 主分類號(hào): C12N5/078
• 分類號(hào): C12N5/078
• 代理公司: 北京中濟(jì)緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 馬國(guó)冉

本發(fā)明涉及一種貝類血細(xì)胞胞外陷阱的誘導(dǎo)方法。采用酵母多糖對(duì)貝類血細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，獲得發(fā)生胞外陷阱的貝類血細(xì)胞。有益效果：將蛤仔血細(xì)胞用酵母多糖誘導(dǎo)，使得血細(xì)胞胞外陷阱的發(fā)生。本發(fā)明的方法能夠有效誘導(dǎo)蛤仔血細(xì)胞發(fā)生胞外陷阱，并抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種貝類血細(xì)胞胞外陷阱的誘導(dǎo)方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

胞外陷阱（extracellular traps, ETs）是一種不同于凋亡和壞死的新型細(xì)胞死亡方式，是以細(xì)胞內(nèi)核酸為骨架，負(fù)載抗菌肽和水解酶組成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，能夠包裹并殺傷外來(lái)入侵的病原微生物。2004年，Brinkmann等在嗜中性粒細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了胞外陷阱現(xiàn)象，其主要在細(xì)胞吞噬和脫顆粒反應(yīng)之后發(fā)揮作用。隨后，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在高等生物的肥大細(xì)胞、酸性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等細(xì)胞中，相繼發(fā)現(xiàn)了胞外陷阱的存在，認(rèn)為其僅存在于固有免疫細(xì)胞中。在固有免疫反應(yīng)中，胞外陷阱可阻止病原微生物由入侵位置向周邊組織擴(kuò)散，集中多種抗菌肽而使局部抗菌肽濃度升高，加大對(duì)病原微生物的殺滅作用，亦可形成不依賴于殺傷作用的防御系統(tǒng)，捕獲入侵微生物并阻止其遷移。

不同類型的細(xì)胞具有不同的胞外陷阱誘導(dǎo)機(jī)制，例如，細(xì)菌和真菌均可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞和粒細(xì)胞釋放胞外陷阱，且體積較大的微生物誘導(dǎo)胞外陷阱釋放的能力更強(qiáng)。此外，脂多糖（LPS）、佛波酯（PMA）可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞發(fā)生胞外陷阱，但它們并不能有效地誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞發(fā)生胞外陷阱。研究發(fā)現(xiàn)，胞外陷阱形成過(guò)程中通常伴隨著多種免疫效應(yīng)因子的發(fā)生，這些免疫蛋白可破壞微生物的細(xì)胞壁或細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，阻止微生物生長(zhǎng)。此類免疫因子主要是一些攜帶高電荷的肽類和蛋白質(zhì)類，包括防御素、內(nèi)源性抗菌肽類、髓過(guò)氧化物酶、細(xì)菌通透性增強(qiáng)蛋白和陽(yáng)離子絲氨酸蛋白酶等，它們可協(xié)同抗菌，大大提高殺菌效果。作為一種新的殺菌策略，胞外陷阱可以在低耗能的情況下對(duì)細(xì)菌形成包裹；促進(jìn)免疫效應(yīng)因子與微生物充分接觸，提高抗菌效率；減小對(duì)病灶及周邊組織的損傷；調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)等。雖然胞外陷阱抗菌效果顯著，但是如果過(guò)度形成或未及時(shí)清除，這種富含水解酶和DNA的膠黏網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可附著于組織內(nèi)，引起細(xì)胞凋亡，直接導(dǎo)致組織損傷，同時(shí)胞外陷阱也可通過(guò)釋放內(nèi)源性危險(xiǎn)信號(hào)，誘導(dǎo)自身免疫的發(fā)生。

海洋無(wú)脊椎動(dòng)物通常生活在富含微生物的水環(huán)境中，經(jīng)常面臨著多種病原微生物的侵襲。胞外陷阱是固有免疫細(xì)胞特有的一種免疫方式，在抵御病原微生物入侵方面作用顯著。目前，有關(guān)海洋無(wú)脊椎動(dòng)物胞外陷阱的研究仍然以激活途徑、殺菌活性等研究?jī)?nèi)容為主。迄今為止，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)海洋無(wú)脊椎動(dòng)物胞外陷阱的研究較少，而國(guó)外學(xué)者也僅在長(zhǎng)牡蠣、日本對(duì)蝦、南美白對(duì)蝦等少數(shù)幾種海洋無(wú)脊椎動(dòng)物中報(bào)道了胞外陷阱的存在。在長(zhǎng)牡蠣中，血細(xì)胞胞外陷阱的形成過(guò)程中往往伴隨著組蛋白H1和H5的釋放，以應(yīng)對(duì)感染和組織損傷。釋放的胞外陷阱可以包被弧菌，阻止其遷移。而在日本對(duì)蝦中，胞外陷阱可被PMA、LPS、肽聚糖（PGN）和大腸桿菌誘導(dǎo)，釋放時(shí)往往伴隨著溶菌酶的發(fā)生。在致病菌較多的情況下，胞外陷阱的抑菌作用優(yōu)于吞噬作用，經(jīng)過(guò)DNase I處理后，胞外陷阱的抗菌活性受到明顯抑制。目前，對(duì)于海洋軟體動(dòng)物胞外陷阱的研究較少，對(duì)于胞外陷阱形成過(guò)程和作用機(jī)制缺乏系統(tǒng)而深入的研究，對(duì)胞外陷阱的應(yīng)用潛能尚無(wú)開發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種貝類血細(xì)胞胞外陷阱的誘導(dǎo)方法。本發(fā)明的方法能夠有效誘導(dǎo)蛤仔血細(xì)胞發(fā)生胞外陷阱。

本發(fā)明一種貝類血細(xì)胞胞外陷阱的誘導(dǎo)方法，采用酵母多糖對(duì)貝類血細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，獲得發(fā)生胞外陷阱的貝類血細(xì)胞。

進(jìn)一步的，采用100-500ng/ml的酵母多糖對(duì)貝類血細(xì)胞進(jìn)行處理0.5-1小時(shí)。

進(jìn)一步的，采用500ng/ml的酵母多糖對(duì)貝類血細(xì)胞進(jìn)行處理1小時(shí)。

進(jìn)一步的，所述貝類是菲律賓蛤仔。

本發(fā)明還提供一種貝類血細(xì)胞胞外陷阱，如上述的誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)得到。