[發明專利]一種黃曲霉毒素產毒基因nor-1的熒光傳感器制備和檢測方法

在審

• 申請號: 201910989515.1
• 申請日: 2019-10-17
• 公開（公告）號: CN110643684A
• 公開（公告）日: 2020-01-03
• 發明（設計）人: 李雅琪;李繼洋;余茜;肖琪;孔德昭;盛建國
• 申請（專利權）人: 江蘇科技大學
• 主分類號: C12Q1/6825
• 分類號: C12Q1/6825;C12Q1/6806
• 代理公司: 32243 南京正聯知識產權代理有限公司
• 代理人: 杭行

1.一種黃曲霉毒素產毒基因nor-1的熒光傳感器的制備方法，其特征在于：熒光傳感器為基于特異性識別黃曲霉毒素產毒基因nor-1的長臂發夾探針，在所述長臂發夾探針的兩端分別帶有NH₂和SH，NH₂修飾上核殼結構的CdTe/CdS量子點，SH修飾上金納米粒子AuNPs，在沒有目標物出現時，CdTe/CdS量子點和AuNPs空間距離靠近，發生熒光共振能量轉移，從而導致CdTe/CdS量子點的熒光淬滅，當目標物nor-1出現時，nor-1與發夾探針特異性互補配對，使發夾探針伸直，拉大了CdTe/CdS量子點和AuNPs的距離，阻斷了熒光共振能量轉移，從而使CdTe/CdS量子點的熒光恢復，通過熒光恢復強度測定nor-1的濃度，采用熒光恢復機制構建的方法建立了一種熒光傳感器；制備所述熒光傳感器的步驟如下：

1）制備CdTe/CdS量子點溶液備用；

2）制備AuNPs備用；

3）長臂發夾探針的修飾：a、將步驟1制備的CdTe/CdS量子點溶液超聲分散，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）溶液，振蕩均勻，加入N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）溶液，振蕩均勻，加入發夾探針儲備液，在室溫下反應，震蕩過夜得到CdTe/CdS-發夾探針，隨后使用乙醇洗滌，離心，最后將CdTe/CdS-發夾探針分散于Tris-HCl緩沖液中備用；b、移取適量制備的AuNPs加入a步驟中制備的CdTe/CdS-發夾探針分散液中，加入NaCl溶液調節鈉離子濃度到一定值，常溫下震蕩反應24h，隨后水洗離心得到CdTe/CdS-發夾探針-AuNPs。

2.根據權利要求1所述一種黃曲霉毒素產毒基因nor-1的熒光傳感器的制備方法，其特征在于：步驟3的a步驟中CdTe/CdS量子點、EDC、NHS與發夾探針的體積比為50:2.2:2.2:1，EDC溶液的濃度為380 mM， NHS溶液的濃度為190 mM，發夾探針的濃度為100 μM。

3.根據權利要求2所述一種黃曲霉毒素產毒基因nor-1的熒光傳感器的制備方法，其特征在于：步驟3的a步驟中Tris-HCl緩沖溶液與分散到Tris-HCl緩沖溶液中的CdTe/CdS量子點的體積比為52:42，Tris-HCl緩沖溶液濃度為10 mM，pH為7.4。

4.根據權利要求3所述一種黃曲霉毒素產毒基因nor-1的熒光傳感器的制備方法，其特征在于：步驟3的b步驟中NaCl溶液的濃度為6M，調節鈉離子濃度為2 M。

5.根據權利要求4所述一種黃曲霉毒素產毒基因nor-1的熒光傳感器的制備方法，其特征在于：步驟3的b步驟中CdTe/CdS-發夾探針與AuNPs的體積比為30:1。

6.一種黃曲霉毒素產毒基因nor-1的熒光傳感器的檢測方法，其特征在于：將數組20μL不同濃度的產毒基因nor-1的標準液加入到制備好的0.1 mL CdTe/CdS-發夾探針-AuNPs溶液中，采用 pH 7.4的Tris-HCl緩沖液定容至2 mL，恒溫震蕩孵育，形成CdTe/CdS-發夾探針-AuNPs/nor-1的復合物，采用熒光分光光度計在380nm下測量溶液的熒光強度，并建立熒光恢復強度與nor-1的標準曲線。

7.根據權利要求6所述的一種黃曲霉毒素產毒基因nor-1的熒光傳感器的檢測方法，其特征在于：所述不同濃度的產毒基因nor-1的標準液為10組，每組的濃度分別為0.05，0.5，5，10，20，40，50，100，150，200 nM。

8.根據權利要求6所述的一種黃曲霉毒素產毒基因nor-1的熒光傳感器的檢測方法，其特征在于：所述孵育時間為40-60 min。