[發明專利]一種黑果枸杞多糖的提取方法及其應用

有效

• 申請號: 201910985328.6
• 申請日: 2019-10-16
• 公開（公告）號: CN110746514B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 蘆靜波;張現峰;李燕子;姚欣宇
• 申請（專利權）人: 蚌埠學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P35/00
• 代理公司: 青島科通知橋知識產權代理事務所(普通合伙) 37273
• 代理人: 張曉

本發明以黑果枸杞為原料提取多糖，采用蒽酮?乙酸乙酯?濃硫酸溶液測定多糖的含量。對黑果枸杞的果實進行粉碎、浸泡、加熱、過濾、抽濾等處理，得到含有黑果枸杞多糖的溶液。提取的黑果枸杞多糖經水提醇沉、抽濾，濾餅置于烘箱中烘干，分別取多糖粉末，加入的DMSO后溶解，磁力攪拌器下攪拌12小時，加入蒸餾水，抽濾。沉淀依次用無水乙醇、丙酮和乙醚洗滌、干燥后得到黑果枸杞多糖精制品；將得到的黑果枸杞多糖精制品經過大孔樹脂脫色、Sevage法脫蛋白后，即得到所述的黑果枸杞多糖。用DMSO法精制使得多糖的得率大大提高，該黑果枸杞多糖應用到K562細胞上，可以通過改變線粒體通路中相關凋亡蛋白的表達量促進細胞凋亡，具有抗白血病腫瘤的作用。

技術領域

本發明屬于多糖提取技術領域，具體涉及一種黑果枸杞多糖的提取方法及其應用。

背景技術

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)是茄科、枸杞屬多年生灌木。分為野生和人工栽培品，其中野生品花青素含量高于人工栽培品。我國的主要產區是青海、新疆和甘肅地區，以青海柴達木盆地為最好，該地區的光照時間長，晝夜溫差大，荒漠鹽土上可形成大面積的黑枸杞灌叢。本實驗取自青海柴達木盆地野生黑果枸杞。黑果枸杞最突出的特點花青素含量高，研究較多，而多糖是其提高免疫力的主要物質基礎，相關報道較少。多糖(polysaccharide)是一類具有天然生物活性的聚合物，由10個及以上單糖連接而成具有多羥基的醛或酮類的化合物，易溶于水。多糖在生物體內不僅是提供能量和組成結構的物質，更具有清除自由基，提高免疫力和抗腫瘤和抑制腫瘤轉移等功能，其作用機制是多靶點，多環節的，顯示出了很好的臨床前景。

現有黑枸杞多糖的提取工藝多為傳統的熱水浸提法或有機溶劑(乙醚、乙醇、石油醚等)脫脂后熱水浸提法，這些常規方法中溶劑用量大、耗時長且提取率低，為提高黑枸杞子的經濟效益，提高黑枸杞子中有效成份的提取率，尋找快速而有效的黑枸杞多糖提取方法是枸杞產業化發展的一個重要研究課題。

白血病是血液系統里異常的原始造血干細胞失去了分化成熟的能力而停留在細胞發育的不同階段的克隆性惡性腫瘤。臨床癥狀為發熱、嚴重貧血、淋巴結腫大及出血，嚴重時會導致急性死亡，是一類危害人類健康的重要的惡性腫瘤，被人們所恐懼。兒童白血病是所有兒童惡性腫瘤中發病率最高的，兒童的慢性白血病，尤其是慢性粒細胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)，是一種起源于造血干細胞的惡性克隆性的增生疾病，在骨髓和造血組織中粒細胞會大量增生積聚并浸潤其他組織和器官，其發病率為1-2/10萬。多糖因其毒副作用小，資源豐富，是抗腫瘤佐劑的發展方向，使腫瘤患者看到希望。

目前多糖的提取方法主要有水提取法，酸堿浸提，微波法，酶法。酸堿提取法后期需要中和，且提取條件比較劇烈，對糖鏈破壞性較大，目前已少用；微波法的提取時間不宜長，功率不宜過高，否則會導致水分蒸發過度，多糖溶出受阻，同時，該法降低了了某些反應的活化能，使得多糖分子間，多糖與其他分子間形成新的作用力，阻止多糖分子的溶出；酶法提取反應溫和，弊端是纖維素酶和果膠酶的運用，難以控制，往往容易得到大量的寡糖，具有抗腫瘤生物活性的寡糖通常含量很少。以上提取方法雖各有利弊，但總體提取效率較低，多糖的獲得在精制環節損失較大，并且黑果枸杞多糖在抗腫瘤上的應用較少的，因此本發明提供一種黑果多糖的提取方法及在抗腫瘤中的應用。

發明內容

為了解決上述的技術問題，本發明提供了一種黑果枸杞多糖的提取方法及其應用。

一方面，本發明提供了一種黑果枸杞多糖的提取方法，包括以下步驟：

(1)將黑果枸杞洗凈后，在40℃下烘干，經過脫水、粉碎、過300目篩、干燥后得到黑果枸杞粉末；

(2)將黑果枸杞粉末加入蒸餾水中，攪拌均勻后，在70-90℃下提取2-3h 后，經過過濾后即得到所述的黑果枸杞多糖的提取溶液；所述黑果枸杞粉末和蒸餾水的料液比為1:20-1:30g/mL；