[發明專利]一種環孢素A代謝基因檢測試劑盒及其應用方法

有效

• 申請號: 201910984004.0
• 申請日: 2019-10-16
• 公開（公告）號: CN110643699B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 魏亮
• 申請（專利權）人: 成都仕康美生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 成都市集智匯華知識產權代理事務所(普通合伙) 51237
• 代理人: 沈璐蓓

1.一種環孢素A代謝基因檢測試劑盒，所述試劑盒包括引物和探針，所述引物和探針由檢測ABCB1 3435CT基因位點突變的SEQ ID No.1-2所示的引物對和SEQ ID No.3-4所示的探針對以及檢測ABCB1 1236CT基因位點突變的SEQ ID No.5-6所示的引物對和SEQ IDNo.7-8所示的探針對組成，

所述試劑盒的應用方法包括如下步驟：

(1)以待測樣品的總的游離DNA為模板，加入SEQ ID No.1-2的引物對和SEQ ID No.3-4的探針對，制備PCR反應液，將制備好的反應液轉移至96孔板中，進行PCR反應；反應結束后，將96孔板轉移至熒光定量PCR讀取儀中，讀取結果并確定ABCB1 3435CT基因位點突變分型；

(2)以待測樣品的總的游離DNA為模板，加入SEQ ID No.5-6的引物對和SEQ ID No.7-8的探針對，制備PCR反應液，將制備好的反應液轉移至96孔板中，進行PCR反應；反應結束后，將96孔板轉移至熒光定量PCR讀取儀中，讀取結果并確定ABCB1 1236CT基因位點突變分型；

(3)根據公式P＝e^s/(1+e^s)計算P值，

其中，S＝6.66+0.32×M1+0.18×M2-0.07×M3，

M1與ABCB1 3435CT基因位點突變分型相關，當分型為CT或TT時M1＝1，分型為CC時M1＝2；

M2與ABCB1 1236CT基因位點突變分型相關，當分型為CT或TT時M2＝1，分型為CC時M2＝2；

M3為年齡；

當P0.813時，屬于環孢素A慢代謝型；

當0.813P0.852時，屬于環孢素A中間代謝型；

當P0.852時，屬于環孢素A快代謝型。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測基因突變位點的探針對SEQ IDNo.3-4的5’端分別標記不同的熒光基團，3’端標記MGB，檢測基因突變位點的探針對SEQ IDNo.7-8的5’端分別標記不同的熒光基團，3’端標記MGB。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述探針對SEQ ID No.3-4的5’端分別標記FAM熒光基團和VIC熒光基團，探針對SEQ ID No.7-8的5’端分別標記FAM熒光基團和VIC熒光基團。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括real-time qPCRMasterMix和超純水。