[發明專利]一種綿羊生產甘膽酸抗體的制備方法

在審

• 申請號: 201910983297.0
• 申請日: 2019-10-16
• 公開（公告）號: CN110818799A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 蒙凱;趙海鋒;李家維;蒙園華;李俊英
• 申請（專利權）人: 六枝特區益捷生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/44
• 分類號: C07K16/44;C07K16/06
• 代理公司: 亳州速誠知識產權代理事務所(普通合伙) 34157
• 代理人: 艾玲

本發明公開了一種一種綿羊生產甘膽酸抗體的制備方法，該方法包括以下步驟：前期準備→抗原準備→綿羊免疫第一針→綿羊免疫第二針→綿羊免疫第三針→綿羊免疫第四針→抽取→分離，保存。采用本發明方法，成本低，過程簡單，不僅能穩定生產抗體，并且產生抗體速度快，制備抗體時間短，生產的抗體水平高，抗原用量小。使生物科技在動物抗體制備方面規模化生產成為可能。

技術領域

本發明涉及生物工程領域，特別涉及一種綿羊生產甘膽酸抗體制備方法。

背景技術

血清甘膽酸（Cholyglycine，CG）是膽酸與甘氨酸結合而成的結合型膽酸之一，在肝細胞內，膽固醇經過及其復雜的酶促反應，轉變成初級膽汁酸。其中有膽酸（CA）和鵝去氧膽酸（CD-CA）。膽酸的類固醇核上有三個羥基（C3、C7、C12），側鏈末端的羥基以肽鍵與甘氨酸結合，分子量為462u。CG正常代謝途徑為腸—肝循環，CG由肝細胞合成，經毛細膽管、膽管排入膽囊，隨同膽汁進入十二指腸，幫助食物消化。95%膽酸在回腸末端重吸收，經門靜脈再回肝臟，由肝細胞攝取再利用。在血清中主要以蛋白結合形式存在，溢入體循環的總量小于1%。在正常情況下，外周血中膽酸含量甚微，正常成人無論空腹或餐后，其血清CG濃度穩定在低水平。當肝細胞受損時，肝細胞攝取CG能力下降，致使血中CG含量增高；膽汁郁滯時，肝臟排泄膽酸發生障礙，而返流血液循環的CG含量增高，也使血CG含量增高。因此，用RIA（radioimmunoassay放射免疫測定法）法測定血清甘膽酸（SCG）是評價肝細胞功能及其肝膽系物質循環功能的敏感指標之一。通過綿羊生產甘膽酸抗體目前是人們需要大量開發的項目。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種生產甘膽酸抗體時間短，采用較少的抗原量生產較多的甘膽酸抗體的綿羊生產甘膽酸抗體的制備方法。

為了解決上述技術問題，本發明的技術方案為：一種綿羊生產甘膽酸抗體的制備方法，該方法包括以下步驟：

（1）.前期準備：在綿羊食料中每餐添加菠菜10-20份，添加在正常綿羊食料中喂食2-3個月，然后剔除多余羊毛；

（2）.抗原準備：選用免疫反應能力更強，血清脂肪含量高的綿羊羊為原料，將甘膽酸抗原經皮下注入綿羊腹股溝外并進行多次加強免疫，

（3）.綿羊免疫第一針：在綿羊的前期準備后選擇頸部、后腹股溝分2個區域注射，皮下注射，頸部兩側平均注射；

（4）.綿羊免疫第二針：注射前以弗氏佐劑進行乳化得抗原乳劑，選擇頸部、后腹股溝分2個區域注射，皮下注射，頸部兩側平均注射；與第一針間隔8-10天；

（5）.綿羊免疫第三針：第三次注射與第二次注射間隔時間為5-8天；選擇綿羊大腿根部，各選取一個注射位置，平均注射；

（6）.綿羊免疫第四針：第四次注射與第三次注射時間間隔2-3天；選擇后腹股溝分2個區域注射，皮下注射，頸部兩側平均注射。

（7）.抽?。嚎偣策M行4次注射，注射完畢后5天，對甘膽酸抗體血清進行抽?。?/p>

（8）.分離，保存。

進一步，上述步驟（1）中每餐添加菠菜15份，添加在正常綿羊食料中喂食2個月18天。

進一步，上述步驟（4）綿羊免疫第二針與第一針間隔9天。

進一步，上述步驟（5）第三次注射與第二次注射間隔時間為6天。

進一步，上述步驟（6）第四次注射與第三次注射時間間隔2天。

共進行4次免疫注射，每次注射較上一針甘膽酸抗原量逐漸增加，更好產生有效抗體。

與現有技術相比，采用本發明的有益技術效果為：