[發明專利]一種溶酶體三磷酸腺苷識別碳點的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201910977175.0
• 申請日: 2019-10-15
• 公開（公告）號: CN110687087B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 李朝輝;耿欣;孫遠強;楊冉;屈凌波
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 王紅培

1.一種溶酶體三磷酸腺苷識別碳點的制備方法，其特征在于步驟如下：

（1）將檸檬酸、三亞乙基四胺與羅丹明混合置于無水乙醇中，配制成前體混合物，放置于微波管中；

（2）將步驟（1）中的微波反應管放置于微波反應器中，將前體混合物加熱到100-135℃，反應0.1-1 h，反應后的產品自然冷卻至室溫；

（3）將步驟（2）冷卻后的產品放入1KDa透析膜中，在乙醇溶液的環境中透析48 h，得到純化后的碳點溶液；

（4）利用旋轉蒸發儀將步驟（3）得到的碳點溶液中的乙醇去除，得到碳點油狀物質；

（5）將步驟（4）中的碳點油狀物質溶于蒸餾水中，真空冷凍干燥，得到碳點固體。

2.根據權利要求1所述的溶酶體三磷酸腺苷識別碳點的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中羅丹明為羅丹明6G，羅丹明B，羅丹明123，羅丹明101，羅丹明110。

3.根據權利要求1所述的溶酶體三磷酸腺苷識別碳點的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中檸檬酸、三亞乙基四胺與羅丹明化合物的摩爾比為（100-2）：（100-2）：1。

4.權利要求1-3任一項所述的制備方法制備的碳點在識別三磷酸腺苷中的應用，其特征在于：所述碳點在體外酸性環境中對三磷酸腺苷進行識別。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于步驟如下：

（1）將碳點的乙醇溶液稀釋在Tris-HCl緩沖中，使終濃度為50 μg/ mL，得到混合液A；

（2）將不同濃度的三磷酸腺苷溶液加入到混合液A中，反應一段時間，得到一系列混合液；

（3）將步驟（2）中的混合液放入熒光比色皿中，利用熒光分光光度計，測量熒光強度。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述步驟（1）中Tris-HCl緩沖溶液的濃度為20 mM，pH范圍為4.0-6.5。

7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述步驟（2）中三磷酸腺苷溶液的濃度為0-5 mM，反應時間為10-60 min。

8.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述步驟（3）中所用熒光分光光度計的激發波長為420-530 nm。

9.權利要求1-3任一項所述的制備方法制備的碳點在識別三磷酸腺苷中的應用，其特征在于，所述碳點在細胞溶酶體中對三磷酸腺苷進行識別，具體步驟如下：

（1）將細胞接種于共聚焦皿中，在37 ℃、5%CO₂、飽和濕度的細胞培養箱中培養12-24 h，得到培養液A；

（2）將碳點加入到步驟（1）得到的培養液A中，在37 ℃、5%CO₂、飽和濕度的細胞培養箱中培養0.5-12 h，得到培養液B；

（3）將溶酶體染色劑LysoTracker^TM Deep Red加入到步驟（2）得到的培養液B中，孵育10min，得到培養液C；

（4）用磷酸鹽緩沖液沖洗細胞；用激光共聚焦顯微鏡成像系統進行拍攝成像。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于：所述步驟（1）中細胞為HeLa細胞、HepG-2細胞、RAW264.7細胞、HL-7702細胞和3T3細胞中的任意一種；所述步驟（2）中碳點加入后的濃度為10-100 μg/mL。