[發明專利]一種北太平洋魷魚纏卵腺抗氧化酶解寡肽的制備方法

有效

• 申請號: 201910973810.8
• 申請日: 2019-10-14
• 公開（公告）號: CN110759969B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 楊最素;唐云平;余方苗;黃芳芳;陳艷
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;C12P21/06
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

本發明涉及魷魚寡肽的制備技術領域，為進一步提升北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的提取率，本發明方法在前期研究基礎上，提供了一種北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的提取方法，使用離子液體EMIMBF4與γ?丁內酯按1:1混合制成復配溶劑處理魷魚內臟組織，并在?50～?60℃低溫協同脈沖電場處理，然后再堿性蛋白酶酶解，提高了北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的提取率，相比前期研究可以提升12.14%～13.66%，而且北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的生物活性也有一定程度的提高。

技術領域

本發明涉及魷魚寡肽的制備技術領域，具體涉及一種北太平洋魷魚纏卵腺抗氧化酶解寡肽的制備方法。

背景技術

魷魚是海洋生物中重要的頭足類動物，其生長周期短、繁殖能力強及資源恢復迅速，是一種可持續發展的海洋漁業資源。近年隨著國內外深海捕撈技術的發展，魷魚業已成為中國主要的遠洋捕撈和水產加工品種。目前，中國年魷魚加工量達40～50萬t，居世界第一位，加工品種主要為阿根廷魷魚、北太平洋魷魚和秘魯魷魚。在魷魚的加工過程中，一般對其胴體進行加工，產生約有35％的魷魚頭、內臟及表皮等下腳料。其中生殖腺(纏卵腺、精巢、卵巢等)占內臟的20％，這些內臟副產物通常被加工成飼料，魷魚纏卵腺等通常只作烹飪食用，生物附加值低并且未及時處理會對環境造成一定的污染。本申請的發明人團隊從開發魷魚下膠料、提升魷魚附加值角度出發，以北太平洋魷魚纏卵腺為原料，提取制備了一種魷魚纏卵腺寡肽，見中國專利申請CN201710160710.4，專利名稱“一種北太平洋魷魚纏卵腺抗氧化酶解寡肽的制備方法”，所得寡肽分子量497.50Da，氨基酸序列為Ala-Tyr-Ala-Ser-Ser，屬于短肽，具有抗氧化特性，可以作為抗氧化藥品、功能食品進行進一步研發，見中國專利申請201710160381.3，發明名稱“一種北太平洋魷魚纏卵腺抗氧化酶解寡肽”，具有積極的應用前景。因此如何深化課題研究，進一步北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的制取方法，提高提取效率，并相應的提升生物活性，具有重要的意義。

目前動物多肽的提取方法有勻漿、超聲波、酶解等。由于離子液體表現的良好溶劑特性，目前也有用離子液體進行多肽提取的研究，但是離子液體低溫下粘度增加，非常不利于操作。清華大學的騫偉中課題組在超級電容器的研究中發現，將離子液體EMIMBF4與γ-丁內酯按體積比1:1復配得到的二元體系可以保持較低的玻璃態溫度，將超級電容器的工作溫度下探至-70℃，表現了較好的低溫特性。但是目前還未出現將這種二元體系應用在多肽提取上的研究。發明人團隊在前期研究基礎上，根據北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的低分子量特點，開展這種二元體系在北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽提取方面的研究，提升北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的提取率。

發明內容

為進一步提升北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的提取率，本發明方法提供了一種北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的提取方法，將離子液體EMIMBF4與γ-丁內酯按體積比1:1復配得到的二元體系應用在北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的制備上，達到提高北太平洋纏卵腺抗氧化酶解寡肽的提取率的目的。

本發明提供如下的技術方案：

一種北太平洋魷魚纏卵腺抗氧化酶解寡肽的制備方法，所述被太平洋魷魚纏卵腺抗氧化酶解寡肽的氨基酸序列為Ala-Tyr-Ala-Ser-Ser，包括以下步驟：

(1)取北太平洋魷魚纏卵腺搗碎后勻漿處理得到勻漿液；

(2)將勻漿液與復配溶劑按料液比1:2～5混合均勻獲得浸泡液，所用復配溶劑為離子液體EMIMBF4與γ-丁內酯按體積比1:1混合制成；

(3)降低浸泡液溫度至-50～-60℃的低溫，向浸泡液中通入脈沖電場處理，然后升至室溫；

(4)離心分離步驟(3)處理后的浸泡液，回收上清液，去離子水洗滌固體并離心得破碎物；

(5)向破碎物中加入堿性蛋白酶溶液處理得到酶解液，滅酶活性，離心分離；