[發(fā)明專(zhuān)利]一種YAP抑制劑及其篩選方法與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910972857.2
• 申請(qǐng)日: 2019-10-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110863001A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張還添;查振剛;桂濤;黎貞燕
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/65
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/65;C12N15/85;C12N15/12
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)哲力專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 44288
• 代理人: 雷興領(lǐng)

1.一種YAP抑制劑的篩選方法，其特征在于，包括：

設(shè)計(jì)引物：設(shè)計(jì)擴(kuò)增YAP基因的引物對(duì)和TAZ基因的引物對(duì)；

制備重組質(zhì)粒：構(gòu)建表達(dá)YAP基因的重組質(zhì)粒，構(gòu)建表達(dá)TAZ基因的重組質(zhì)粒；其中，表達(dá)YAP基因的重組質(zhì)粒和表達(dá)TAZ基因的重組質(zhì)粒各帶一半的熒光基團(tuán)；

融合：將表達(dá)YAP基因的重組質(zhì)粒和表達(dá)TAZ基因的重組質(zhì)粒通過(guò)lipo2000轉(zhuǎn)染入細(xì)胞中，誘導(dǎo)表達(dá)得到異源二聚體；

構(gòu)建篩選模型：將待篩選的抑制劑加入已表達(dá)熒光的細(xì)胞的培養(yǎng)基中，處理24-48h，若熒光強(qiáng)度減弱，則該抑制劑為YAP的有效抑制劑。

2.如權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，設(shè)計(jì)引物步驟中，所述TAZ的上游引物如SEQ ID No.1所示，所述TAZ的下游引物如SEQ ID No.2所示。

3.如權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，設(shè)計(jì)引物步驟中，所述的YAP上游引物如SEQ ID No.3所示，所述YAP的下游引物如SEQ ID No.4所示。

4.如權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，制備重組質(zhì)粒步驟中，表達(dá)YAP和TAZ基因的載體質(zhì)粒均為雙分子熒光互補(bǔ)載體質(zhì)粒。

5.如權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，制備重組質(zhì)粒步驟中，表達(dá)YAP基因的載體質(zhì)粒為pCMV-Myc-VN155-Linker-MCS。

6.如權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，制備重組質(zhì)粒步驟中，表達(dá)TAZ基因的載體質(zhì)粒為pCMV-HA-VC155-Linker-MCS。

7.如權(quán)利要求1所述的篩選方法，其特征在于，制備重組質(zhì)粒步驟中，以人293T細(xì)胞cDNA為模版擴(kuò)增人TAZ和YAP基因。

8.由權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的篩選方法得到的YAP抑制劑。

9.如權(quán)利要求8所述的YAP抑制劑在制備骨腫瘤藥物中的應(yīng)用。