[發明專利]一種人腸道菌群定量檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 201910971437.2
• 申請日: 2019-10-14
• 公開（公告）號: CN110592246A
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 李強;朱羅羅;徐威;張輝;林清源
• 申請（專利權）人: 杭州同創越誠基因科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04
• 代理公司: 33260 杭州五洲普華專利代理事務所(特殊普通合伙)
• 代理人: 丁少華

本發明公開了一種人腸道菌群定量檢測方法及應用，人腸道菌群定量檢測方法包括以下幾個步驟S01、糞便樣本采集、存放與標記；S02、糞便樣本處理與檢測：取糞便樣本上清液，加入標定量的內參菌株Sa，采用磁珠法糞便DNA提取試劑盒提取核酸，設置陰性對照組、內參菌株組和若干標準組測定每組濃度后進行熒光PCR檢測；S03、檢測結果分析：統計檢測菌的含量，確定檢測糞便樣本與健康人群的菌群范圍差異，從而評估目標人群的腸道健康情況；上述檢測方法應用于檢測人體糞便中菌群的含量并與健康人群各菌群參考范圍進行比對，以評估人體腸道微生態的健康狀況。本發明具有可有效檢測腸道菌群的數量進而評估人體腸道健康狀況，有助于腸道健康管理等優點。

【技術領域】

本發明涉及微生物檢測的技術領域，特別是一種人腸道菌群定量檢測方法及應用的技術領域。

【背景技術】

人體腸道內存在大量共生微生物，并通過多種途徑影響人體健康，尤其是各種代謝物在人體的健康促進和疾病發生、發展中起著重要作用。腸道微生態研究發現，糖尿病、腸易激綜合征(IBS)、炎性腸病(IBD)、肥胖、抑郁癥等疾病均與腸道微生態相關，最新研究發現阿爾茲海默癥或與腸道微生物有關，腸道微生態平衡正成為人體健康的重要標志。維持腸道微生態的動態平衡，有助于人體抵御各種疾病的干擾，保持健康狀態，維持腸道微生態的平衡主要是維持腸道菌群的數量保持在穩定健康數值范圍內。

腸道菌群種類繁多，主要有普拉梭菌、腸球菌、擬桿菌、雙歧桿菌、乳酸菌、奇異菌屬、柔嫩梭菌、真桿菌、腸桿菌、酪酸梭菌、毛螺菌、阿克曼菌、弧菌等。腸桿菌(Enterobacteriaceae)，該菌科為人體腸道內正常菌群，參與人體的代謝及免疫，但該菌屬，尤其是大腸桿菌，很大一部分菌為致病菌或條件致病菌，當人體免疫力低下或細菌侵入腸道以外部位時，也可引起疾病多脂飲食，會造成該菌科條件致病茵茵群增加。腸球菌(Enterococcus)，是人及動物腸道中正常菌群的一部分，它不像乳酸菌一樣被認為是安全可靠的，當抗生素大量使用或宿主免疫力低下時，宿主與腸球菌之間的共生狀態失衡，腸球菌離開正常寄居部位進入其他組織器官，分泌細胞溶解素、明膠酶等毒力因子侵襲破壞宿主組織細胞，引起宿主的非特異性免疫應答。擬桿菌(Bacteroides)，參與人體多種代謝過程，部分菌株被報道具有條件致病性，易引起機體的機會性感染。該菌可調節營養吸收，粘膜免疫，外源物質代謝，及腸粘膜血管的形成及發育等。雙歧桿菌(Bifidobacteria)、乳酸菌(Lactic Acid Bacterial，LAB)，均為益生菌，參與機體多種代謝過程，并產乳酸，以雙歧桿菌為有益菌的代表，促進腸道蠕動，改善便秘，減少吲哚、亞硝酸胺等致癌物質產生，促進礦物質及維生素D的吸收和利用等，及增強機體免疫功能。同時可將人體無法吸收的膽固醇轉變成糞甾醇，從糞便中排出，具有降血脂的功能等等，為人體健康的晴雨表。奇異菌屬(Atopobium cluster)從葡萄糖主要的發酵產物是乳酸，其他尚有乙酸和甲酸。產丁酸菌(Butyric Acid Bacterial，BAB)，代表菌：酪酸梭菌(Clostridial clusters CGl)，柔嫩梭菌(Clostridium leptum)，直腸真桿菌(Eubacterium rectale)，普拉氏梭桿菌(F.prausnitzii)。丁酸在腸道健康方面起著十分重要的作用，一方面，為腸粘膜細胞的主要能量來源，一方面抑制腸道中的致病菌，保持腸道菌群平衡，從而預防和治療腸道疾病方面起至決定性作用。普拉梭菌，作為腸道一種抗炎的細菌，有報道稱其可以抵消克羅恩病(Crohn’s Disease)患者體內的異常免疫反應對消化道的損傷。同時，它與8種人體的代謝物質有統計相關性，參與宿主多種代謝過程。毛螺旋菌科(Lachnospiraceae)能發酵葡萄糖和多種碳水化合物并產生乳酸、乙酸等，還能用來預防結腸炎等疾病?；【鷮?Vibrio)細菌種類多，分布廣泛，尤以水中最為常見。引起人類疾病的主要有霍亂弧菌的古典生物型和埃爾托生物型、副溶血性弧菌，不凝集弧菌可引起霍亂樣疾病或輕度腹瀉。