[發明專利]一種三唑磷分子印跡靜電紡絲層析試紙條的組建方法

有效

• 申請號: 201910959017.2
• 申請日: 2019-10-10
• 公開（公告）號: CN110687279B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 佘永新;洪思慧;王淼;曹振;何亞薈;王靜
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531;D01D5/00;D01D1/02;C08J9/28;C08J9/26;C08F220/06
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467
• 代理人: 高琦

本發明涉及一種三唑磷分子印跡靜電紡絲層析試紙條的組建方法，結合靜電紡絲、分子印跡及免疫層析試紙檢測技術，用靜電紡絲法在NC膜上制備分子印跡T線(檢測限)，羊抗小鼠IgG作為C線(質控線)，通過三唑磷半抗原偶聯小鼠IgG偶聯異硫氰酸熒光素(THBu?IgG?FITC)熒光探針與目標物三唑磷直接競爭分子印跡結合位點而產生的熒光變化，建立三唑磷分子印跡靜電紡絲層析熒光檢測技術。本發明提供的三唑磷吸附功能材料具有較高的選擇性，采用虛擬模板可解決模板滲漏問題，可以代替生物抗體應用于免疫層析技術當中；該吸附功能材料具有較高的穩定性、較長的使用壽命和較強的抗惡劣環境的能力，克服了傳統生物抗體制備周期長、易失活、成本高等缺點。

技術領域

本發明涉及食品安全檢測技術領域，具體而言，涉及一種三唑磷分子印跡靜電紡絲層析試紙條的組建方法。

背景技術

三唑磷(Triazophos)是一種中毒、廣譜有機磷殺蟲劑，在谷物、水果和蔬菜上廣泛使用。由于三唑磷化學穩定性好、半衰期長，使其在環境中極易殘留，對環境和人類健康造成潛在危害。自2016年12月31日，我國明令禁止在蔬菜上使用三唑磷。目前三唑磷的檢測技術主要有確證技術和免疫分析技術，但這些方法通常存在儀器昂貴、分析時間長、抗體制備困難等諸多缺陷。因此，設計合成具有特異性強、穩定性好、制備成本低的仿生識別材料，建立靈敏、簡單、快速、穩定、廉價的檢測方法具有重要的現實意義。

免疫層析試紙檢測技術是一種將單克隆抗體技術、免疫標記技術及免疫層析技術等多種方法結合起來的固相標記免疫檢測技術，應用于抗原、抗體和半抗原的定性、半定量和定量檢測。其使用方便、快速、特異強、成本低、制作簡單，不需要專業人員和大型昂貴儀器，成為最常用的免疫分析方法之一。但通常的免疫層析需要使用抗體，而抗體的使用存在成本高、儲存條件高、需要犧牲動物等不足。分子印跡替代抗體有望克服這些缺點；截止目前，關于分子印跡仿生免疫層析技術只有謝蓉建立的莠去津競爭性金標試紙條。該方法存在分子印跡微球粒徑較大可能會導致層析效果不好從而影響實驗靈敏度的缺點，另外由于缺乏分子印跡對應的抗體，該方法采用兩個試紙條來分別達到檢測和質控的目的，容易產生誤差而導致結果準確度下降。

為克服以上缺點，本發明擬采用新的分子印跡仿生免疫層析模式，將分子印跡直接附著在NC膜(硝酸纖維素膜)上，但若直接通過劃線法將分子印跡固定到NC膜上，一是不容易固定，分子印跡會隨溶液層析；二是分子印跡上的特異性結合位點不容易暴露出來，從而導致實驗靈敏度下降。為解決這一問題，我們擬在NC膜上利用靜電紡絲技術制備分子印跡納米纖維膜，既能很好的固定住分子印跡，又能將分子印跡的結合位點充分暴露出來，增加分子印跡與目標物的接觸面積，提高傳質速率。

靜電紡絲技術是一種獨特的纖維制造工藝，利用靜電力從聚合物溶液或熔體中生產細纖維，由此生產的纖維具有比傳統紡紗工藝更細的直徑(從微米到納米)及更大的表面積。在靜電紡絲過程中，在毛細管末端由表面張力保持的聚合物溶液受到電場的作用，并由該電場在液體表面上感應出電荷，當施加的電場達到臨界值時，排斥電力克服表面張力，溶液的帶電射流從泰勒錐的尖端噴出，并且在毛細管尖端和收集器之間的空間中發生不穩定的快速噴射，此過程中溶劑蒸發，并最終在收集器上固化成纖維。與常規纖維相比，靜電紡絲纖維比表面積大、孔隙率高、物理機械性能強，已廣泛應用于組織工程支架、藥物輸送、過濾、醫療保健、生物技術、環境工程、防御和安全等領域。

靜電紡絲技術與分子印跡技術的結合，既賦予了靜電紡絲纖維膜特異性吸附能力，又增大了分子印跡聚合物的比表面積，提高吸附容量和傳質速率。近幾年來，應用靜電紡絲技術制備分子印跡膜受到了廣泛關注。目前，用靜電紡絲法制備分子印跡纖維膜的方法主要有包埋法和直接電紡法。本發明采用包埋法，即用沉淀法制備分子印跡微球，然后直接混入電紡液中制備分子印跡納米纖維。截止目前，尚未有將靜電紡絲技術與免疫層析技術聯用的報道。