[發明專利]一種能治療阿爾茨海默病的間充質干細胞制劑及其應用

在審

• 申請號: 201910948903.5
• 申請日: 2019-10-08
• 公開（公告）號: CN110585241A
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 曾琳琳;張福強;付學奇;姜金蘭;張競天;王宇翔;牛涵;宋佳玥
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61P25/28;A61K33/26
• 代理公司: 32322 蘇州創策知識產權代理有限公司
• 代理人: 范圓圓

本發明提供了一種能治療阿爾茨海默病的間充質干細胞制劑及其應用，所述間充質干細胞為人的臍帶血間充質干細胞，本發明所使用的臍帶血間充質干細胞作為治療阿爾茨海默病制劑的原料進行制備，其通過與聚多巴胺修飾四氧化三鐵納米粒子結合，給藥至阿爾茨海默病模型小鼠體內，顯著改善了小鼠記憶能力，為阿爾茨海默病的藥物開發提供了新方法。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體為一種能治療阿爾茨海默病的間充質干細胞制劑及其應用。

背景技術

間充質干細胞是干細胞家族中一種具有分化成為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經、肝、心肌、內皮等多種組織細胞的多種分化潛能的細胞亞群，并且經過連續傳代及凍存后仍具有多向分化潛能。目前，由于間充質干細胞具有較強的分化潛能及可自體移植等優點，已被廣泛用于干細胞治療藥物的研發。阿爾茨海默病是一種具有隱匿性和進行性的神經退行性疾病，其多發于中老年人群并且長久以來對于中老年人群的正常生活都有著很大的詬病。而目前世界上對于阿爾茨海默病的治療方法大多僅限于預防與延緩病情。納米生物材料在近年來都被試圖用作新藥的開發，原因在于其具有很好的生物相容性以及高度靶向性。四氧化三鐵納米生物材料在與細胞孵育培養后，表現出了比較好的生物相容性。針對以上所述，那么如何發明出一種能治療阿爾茨海默病的間充質干細胞制劑及其應用，這成為我們需要解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能治療阿爾茨海默病的間充質干細胞制劑及其應用，解決了背景技術中所提出的問題。

為解決上述問題，本發明提供如下技術方案：一種能治療阿爾茨海默病的間充質干細胞制劑及其應用，包括以下應用方法，

S1、提取小鼠的臍帶血間充質干細胞并培養；

S2、制備聚多巴胺修飾的四氧化三鐵納米粒子并用以后續實驗；

S3、種植人神經母細胞瘤細胞于六孔培養板中，加入OA對細胞進行凋亡誘導，以此對細胞系進行間充質干細胞的trans-well誘導，使用CCK-8試劑盒檢測細胞生存情況，使用間充質干細胞進行trans-well的SH-SY5Y細胞系相較未進行trans-well的細胞系死亡數量減少；

S4、種植人神經母細胞瘤細胞于六孔培養板中，加入OA對細胞進行凋亡誘導，以此對細胞系進行間充質干細胞的trans-well誘導，利用western-

blot檢測細胞內蛋白水平表達情況，使用間充質干細胞進行trans-well的細胞系相較未進行trans-well的細胞系蛋白表達水平更趨正常；

S5、將間充質干細胞以及經四氧化三鐵納米材料修飾過的間充質干細胞使用細胞熒光染色材料進行染色，后通過尾靜脈將藥物注射于阿爾茨海默病模型小鼠體內，通過使用熒光成像系統對染色細胞進行定位，相較于正常的MSC細胞，經過四氧化三鐵納米材料修飾的MSC細胞更多的聚集于腦部，表明四氧化三鐵納米材料具有良好的靶向性；

S6、將間充質干細胞與四氧化三鐵納米生物材料于同一培養皿中孵育，后通過尾靜脈將干細胞藥物注射于阿爾茨海默病模型鼠中，通過western-blot實驗檢測小鼠腦部各種標志性蛋白的表達情況，干細胞藥物處理能明顯改善阿爾茨海默病模型小鼠腦內TAU、BDNF、APP、SYN等蛋白的表達水平；

S7、利用水迷宮實驗平臺對完成注射周期的小鼠進行行為學測試，通過檢測小鼠到達固定隱藏平臺的時間分析其記憶能力，注射間充質干細胞的模型鼠相較未注射干細胞的小鼠到達隱藏平臺的時間短且能表現出更強的記憶能力，說明間充質干細胞對阿爾茨海默病模型小鼠的記憶能力有很明顯的改善作用；

S8、利用阿爾茨海默病模型小鼠組織提取RNA，通過反轉錄獲得小鼠cDNA，后利用在線軟件設計TAU、BDNF、APP、SYP等蛋白基因的引物，使用Real-time PCR進行基因鑒定。