[發明專利]用于質譜診斷地中海貧血癥的特征蛋白質譜模型及其用途

在審

• 申請號: 201910945999.X
• 申請日: 2019-10-01
• 公開（公告）號: CN110658252A
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發明（設計）人: 常亮;牛燕燕;呂倩;王興宇;付書輝;馬慶偉;向華
• 申請（專利權）人: 長沙湘華質譜醫學科技有限公司
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62;G01N33/68;G01N33/72
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于診斷地中海貧血的特征蛋白的質譜模型，該質譜模型包括序列分別如SEQID No.1-3所示的特征蛋白標記組合物，其中，該質譜模型的制備方法包括：

1)收集多例臨床確診的患者全血和正常對照人員的全血作為兩組全血標本，進行低溫冷凍備用；

2)對全血蛋白多肽進行質譜前預處理；

3)對預處理過的兩組全血多肽進行質譜檢測讀取，獲得兩組全血多肽的指紋圖譜；

4)對所有的癌患者和正常人全血多肽的指紋圖譜進行標準化處理，并收集數據；

5)對所得數據進實驗質控處理，共有以下質譜峰(m/z)：5042，5809，5933，6986，7562，7667，7932，8085，8475，8580，15120，15329，15859，15989

6)從步驟5)中篩選出具有下述質荷比的3個地中海貧血癥特征多肽峰：15120m/z，15859m/z，15989m/z的三個蛋白峰，并根據所述蛋白多肽標記和質荷比峰的變化建立用于診斷地中海貧血癥的質譜模型，其中，所述3個地中海貧血癥特征蛋白的多肽序列均為正常對照蛋白，序列分別如SEQ ID No.1-3所示。

2.權利要求1的質譜模型，其中所述三個蛋白峰的m/z偏差允許范圍±0.15％，以及，健康人群特征蛋白(SEQ ID NO:1-2)峰的表征質荷比分別為：15120m/z(α珠蛋白片段)或15119m/z(α珠蛋白片段)、15859m/z(β珠蛋白片段)或15867m/z(β珠蛋白片段)，和/或，所述地中海貧血患者特征蛋白(SEQ ID NO:1-2)峰的表征質荷比分別為：15120m/z(α珠蛋白片段)或15112m/z(α珠蛋白片段)、15859m/z(β珠蛋白片段)或15853m/z(β珠蛋白片段)。

3.權利要求1或2的質譜模型，其中當表征β珠蛋白片段峰的15859m/z下調表達或2歲以上人群中表征ν珠蛋白片段峰的15989m/z上調表達，預示被檢測人為地中海貧血患者或潛在患者；地中海貧血患者治療后，當表征ν珠蛋白片段峰的15989m/z相對于原表達量而上調表達時，預示被檢測人的藥物療效效果比較好，可以繼續使用該藥物或該方法進行治療。

4.權利要求3的質譜模型，其中以15120m/z峰強度作為標準強度1，

將15859m/z峰強度的臨界值設定為0.5；當15859m/z表達低于0.5時，預示被檢測人為地中海貧血患者或潛在患者；在療效追蹤過程中，當15989m/z相對于原表達量的上調表達超過0.1時，預示被檢測人為地中海貧血患者或潛在患者當前采用的治療方法或是藥物療效較好。

5.權利要求1-5的質譜模型，其中步驟2)樣本處理過程中，預先加入接近待檢蛋白分子量范圍的1-3種內標蛋白標準品，優選脫輔基肌紅蛋白(Apomyoglobin)的標準品進行相對定量，能更加準確地對血紅蛋白進行相對定量，其中所述脫輔基肌紅蛋白(Apomyoglobin的蛋白質譜峰值m/z為16952。

6.通過權利要求1-5的質譜模型所制備的用于診斷地中海貧血癥的診斷產品。

7.權利要求6的診斷產品，其中所述診斷產品選自診斷試劑盒，該試劑盒由全血質控品、緩沖液、基質溶液組成，基于飛行時間質譜的地中海貧血檢測軟件、地中海貧血質譜檢測專用靶板，該試劑盒可用于待測樣品進行質譜時提供標準數據或曲線的比對，以判斷待測樣品中是否是地中海貧血患者或是藥物及治療方法是否有效。

8.權利要求7的診斷產品，其中該試劑盒還包含用于進行相對定量的內標蛋白標準品脫輔基肌紅蛋白(Apomyoglobin)，該內標蛋白標準品接近特征蛋白檢測范圍，通過比較內標蛋白的峰值強度，可直接換算出特征蛋白的峰值絕對強度及其上調或下調的變化值，其中該蛋白質譜峰值m/z為16952。

9.通過權利要求1-5所述的質譜模型，在制備診斷地中海貧血癥的產品中的用途。

10.權利要求9的用途，其中所述產品包括：診斷試劑、檢測專用靶板、芯片、載體、試劑盒等。