[發(fā)明專利]用于皮膚再生及傷口治愈的含有誘導(dǎo)的外泌體的組合物

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910945374.3
• 申請(qǐng)日: 2019-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN111073882A
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李镕丞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 金賢錫
• 主分類號(hào): C12N13/00
• 分類號(hào): C12N13/00;C12N5/071;A61K35/36;A61P17/00;A61P17/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 呂琳;宋東穎

本發(fā)明公開了具有皮膚再生及傷口治愈效果的外泌體的制備方法，該方法包括：向細(xì)胞直接/間接提供超聲波刺激的步驟；以規(guī)定時(shí)間培養(yǎng)上述細(xì)胞及培養(yǎng)基的混合物的步驟；以及從上述混合物分離外泌體的步驟，其中，直接提供刺激是指向含有細(xì)胞的培養(yǎng)基施加超聲波刺激，間接提供刺激是指向未含有細(xì)胞的培養(yǎng)基施加超聲波刺激之后，混合上述培養(yǎng)基和上述細(xì)胞。這種外泌體的制備方法可從體細(xì)胞中獲取具有皮膚再生及傷口治愈效果的大量的外泌體，其可誘導(dǎo)皮膚再生及傷口治愈的多種因子。外泌體具有基于磷脂的膜結(jié)構(gòu)，容易滲透毛孔，由此遞送物質(zhì)的效率高，故可以有效地誘導(dǎo)皮膚再生及傷口治愈，沒有使用合成藥品時(shí)出現(xiàn)的副作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種具有皮膚再生及傷口治愈效果的外泌體(exosome)、其制備方法以及含有上述外泌體的組合物。

背景技術(shù)

就作為人體中最大組織的皮膚而言，除了具有接收感覺、合成維生素D、參與體溫調(diào)節(jié)及免疫監(jiān)視的多種功能之外，作為提供對(duì)于疾病及水分蒸發(fā)的保護(hù)膜的基本的第一道防線而起到重要作用。皮膚的傷口治愈是伴隨有止血(hemostasis)、炎癥(inflammation)、增殖(proliferation)及重塑(remodeling)的四個(gè)步驟的復(fù)雜的步驟。在從傷口形成開始數(shù)小時(shí)內(nèi)發(fā)生的第一個(gè)步驟中，發(fā)生血液凝固(clotting)及形成臨時(shí)的傷口基質(zhì)(provisional wound matrix)的步驟，經(jīng)過(guò)第一個(gè)步驟而被激活的炎癥步驟中，通過(guò)噬中性粒細(xì)胞(neutrophil)募集、單核細(xì)胞(monocyte)的參與及變性來(lái)去除病原體及壞死組織。增殖步驟中，發(fā)生肉芽組織(granulation tissue)生成、血管網(wǎng)恢復(fù)、向成纖維細(xì)胞(fibroblast)表面的移動(dòng)、再上皮化(reepithelization)、新生血管生成(angiongenesis)等，從傷口形成的21日開始延續(xù)至一年以上的成熟(remodeling)步驟中，在增殖步驟中活躍進(jìn)行的過(guò)程緩慢停止，例如，肉芽組織的形成通過(guò)細(xì)胞凋亡(apoptosis)緩慢停止等，在增殖步驟中大量生成的III型膠原由更堅(jiān)韌的I型膠原所代替，肌成纖維細(xì)胞多重連接在膠原上，減少疤痕面積。在上述過(guò)程中，如果至少有一個(gè)步驟沒有發(fā)揮出適當(dāng)?shù)淖饔茫瑒t傷口的治愈會(huì)延遲或者能使傷口慢性化，在這種情況下，尤其會(huì)對(duì)作為第一道防線的作用會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的問題，相反，即使實(shí)現(xiàn)治愈，也可能由于疤痕增生等而導(dǎo)致外形上的問題。

皮膚附屬結(jié)構(gòu)(skin appendages)包括毛根、皮脂腺、手指甲及汗腺。大傷口的治愈過(guò)程按物種而有所差異。對(duì)于魚類及兩棲類等低等脊椎動(dòng)物而言，包括鱗、分泌腺等皮膚附屬結(jié)構(gòu)的皮膚的再生會(huì)非常完整。相反，就哺乳類而言，除了在胚胎階段之外，皮膚不會(huì)完整再生，從而會(huì)生成沒有皮膚附屬結(jié)構(gòu)的疤痕組織，使得無(wú)法正常地執(zhí)行皮膚附屬結(jié)構(gòu)的功能(與額外的保護(hù)、保溫及感覺相關(guān))，因此，在美容及心里方面，導(dǎo)致了生活質(zhì)量的降低。

生物體來(lái)源的蛋白質(zhì)、基因、細(xì)胞等作為原料的藥品(生物藥品(biologics))，與合成藥品不同，不會(huì)在體內(nèi)產(chǎn)生代謝產(chǎn)物，由此毒性較低，并且選擇性地作用于疾患的病因，從而效果好，副作用較少。最近，隨著這種優(yōu)點(diǎn)受到關(guān)注，正在開發(fā)以皮膚再生及傷口治愈為目的的生物藥品，尤其重點(diǎn)開發(fā)利用干細(xì)胞的方法，其中，公開了利用干細(xì)胞本身、其提取物或培養(yǎng)液的方法等。但是，就利用干細(xì)胞的上述組合物而言，共同具有效率性及經(jīng)濟(jì)性差的問題(該問題由苛刻的細(xì)胞的分離及擴(kuò)增而導(dǎo)致)。并且，對(duì)于干細(xì)胞治療劑而言，存在轉(zhuǎn)移為癌癥等風(fēng)險(xiǎn)，而就干細(xì)胞提取物而言，從細(xì)胞中提純活性成分并不容易，存在需付出較多的費(fèi)用和時(shí)間的缺點(diǎn)，且對(duì)于干細(xì)胞培養(yǎng)液而言，除了活性成分之外，還含有從細(xì)胞中分泌的排泄物或?yàn)榱朔乐刮廴径砑拥目股丶把宓?這些為未驗(yàn)證用于人體時(shí)的風(fēng)險(xiǎn)的物質(zhì))。